郭克磊，李颖利，卞博，韩立，李凯，张红，卞华#(.南阳理工学院张仲景国医国药学院，河南 南阳 47004；2.南阳理工学院河南省张仲景方药与免疫调节重点实验室，河南 南阳 47004；.南阳市中心医院风湿免疫科，河南 南阳 47000)

    硬皮病又名系统性硬化病，是以皮肤和内脏器官纤维化为主要特征的自身免疫性疾病，其发病机制主要包括纤维化、免疫炎症、血管损伤等，而免疫系统失调特别是辅助性 T 细胞 17(T helper lymphocytes 17，Th17)/调节性T细胞(T regulatory cell，Treg)失衡在硬皮病发病及病程进展中起着重要作用[1]。表观遗传学研究发现，转录因子RORγt(又名RORC或RORC2)基因启动子低甲基化水平会导致维甲酸相关孤核受体(retinoic acid related nuclear orphan receptor，RORγt)的高表达，进而促进Th17分化，如在硬皮病患者Th17细胞中就存在RORγt基因低甲基化、蛋白高表达的现象[2-3]。

    中医学中无硬皮病这个病名，其应属皮痹等范畴。本课题组前期突破硬皮病的传统治疗观点，率先提出“肺脾肾-皮毛”相关理论。结合硬皮病的临床表现，本课题组认为硬皮病病性属本虚标实——本虚是肺脾肾三脏之阳气虚，标实是寒邪凝结、湿痰瘀等浊邪阻络，脉络不通；病位在络脉，与肺脾肾密切相关[4]。温阳化浊通络方是以黄芪桂枝五物汤、补肺汤、二仙汤等为基础创制而成，由黄芪、党参、桂枝、淫羊藿、积雪草、白芥子等10味药材组成。诸药相伍，通补并用，标本兼顾，具有补肺健脾益肾、化浊通络之效，共奏扶正祛邪之功，对硬皮病具有良好的疗效[5]。本课题组前期研究表明，温阳化浊通络方能够调节硬皮病患者外周血Th17/Treg失衡，降低Th17细胞数量及白细胞介素17(interleukin 17，IL-17)水平，同时其还可通过下调微小核糖核酸-155、IL-6及酪氨酸激酶2、信号转导和转录激活因子3等的表达，从而抑制Th17细胞增殖[6-8]。本研究拟在前期研究基础上，进一步采用血清药理学的方法，通过观察温阳化浊通络方含药血清对Th17细胞增殖、RORγt mRNA及其蛋白表达、RORγt基因甲基化的影响，探讨其治疗硬皮病的作用机制，为温阳化浊通络方防治硬皮病提供理论参考。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用的主要仪器包括ABI Veriti 96W型梯度聚合酶链式反应(PCR)仪、ABI ViiA7型实时荧光定量PCR仪、NanoDrop 2000型核酸蛋白浓度分析仪(美国Thermo Fisher Scientific公司) ......