杨蕙华，陈大红，刁文婧，吴亚菲，李琴#a，刘皋林1，#b(1.上海交通大学药学院，上海 0040；.上海交通大学医学院附属第一人民医院临床药学科，上海 00080)

    肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球发病率增长最迅速的癌症之一，其主要危险因素包括肥胖、吸烟、乙型肝炎病毒及酒精性肝炎，患者的5年生存率仅20%[1]。索拉非尼是一种多激酶抑制剂，可抑制Raf激酶、血管内皮细胞生长因子受体、血小板衍生生长因子受体、Fms样酪氨酸激酶3、原癌基因c-Kit及孤儿受体酪氨酸激酶等的活性，具有抑制肿瘤生长和阻断肿瘤新生血管形成的双重抗肿瘤效应[2]。2007年索拉非尼被批准用于手术不能切除的晚期HCC的一线治疗，成为HCC治疗的重大突破[3]，但随之产生的耐药问题给肝癌治疗带来了巨大的挑战[4]。因此，阐明HCC索拉非尼耐药的机制及寻找HCC治疗的新靶点将具有重要临床意义。

    葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydro‐genase，G6PD)是磷酸戊糖途径的限速酶和关键酶，可促进磷酸戊糖代谢产生还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸而平衡氧化应激水平，且其高表达与多种恶性肿瘤(如肾细胞癌、肺癌等)的进展密切相关[5―7]。相关研究还发现，G6PD可促进非小细胞肺癌、卵巢癌、胰腺癌等对顺铂、紫杉醇及厄洛替尼产生耐药[8―10]，因此，抑制G6PD可增强抗肿瘤药物对耐药细胞的毒性作用。目前，有关G6PD在HCC索拉非尼耐药中的作用未见报道。基于此，本研究将探讨G6PD在HCC索拉非尼耐药中的作用机制，以期为寻找逆转HCC索拉非尼耐药的潜在靶点提供理论依据。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器包括BB150型细胞培养箱(美国Thermo Fisher Scientific公司)、5424R型低温离心机(德国Eppendorf公司)、J2-MC型高速冷冻离心机[贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司]、BD_Accuri_C6型流式细胞仪(美国BD公司)、Epoch 2t型全波长酶标仪(美国BioTek有限公司)、Tannon 5200型化学发光成像系统(上海天能科技有限公司)。

    1.2 主要药品与试剂

    索拉非尼、G6PD抑制剂6-氨基烟酰胺(6-aminonicotinamide，6AN)、盐酸嘌呤霉素、CCK-8试剂盒购自美国 MCE 公司(批号分别为 83807、87547、87126、100266)；Annexin V FITC Apop Dtec Kit I购自美国BD公司(批号0076884)；胎牛血清、胰蛋白酶、DMEM培养基购自美国Gibco公司(批号分别为2148169CP、8121521、2462637)；ECL发光试剂盒购自苏州新赛美生物技术有限公司(批号P10300)；兔源蛋白激酶B(pro‐tein kinase B ......