陈仁强，刘 桢，胡慧玲，李林锋，张 春#(.西南医科大学药学院，四川 泸州 646000；2.西南医科大学附属医院药学部，四川泸州 646000)

    紫花地丁是堇菜科堇菜属植物紫花地丁Viola yedoensisMakino的干燥全草，具有清热解毒、凉血消肿的功效[1]。现代药理研究证实，紫花地丁具有抗菌、抗肿瘤等多种生物活性[2]。已有研究表明，紫花地丁提取物可通过靶向蛋白酶等方式抑制肺癌细胞侵袭，对人非小细胞肺癌细胞A549 具有抑制作用，且其黄酮类成分还具有显著的抗氧化活性[3-5]。

    香豆素类成分是植物中一类重要的次生代谢产物，具有抗凝血、抗菌、抗病毒等多种生物活性[6]。紫花地丁含有丰富的香豆素类成分，如秦皮乙素、秦皮甲素等[7]。本研究拟采用乙醇回流提取法提取紫花地丁总香豆素，利用响应面法优化其提取工艺，并初步评价所得纯化物的抗氧化活性和抗肿瘤活性，旨在为该药材的开发与利用提供参考依据。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器包括Cary60 型紫外-可见分光光度计、Multiskan Go 型多功能酶标分析仪(美国Thermo Fisher Scientific 公司)，CKX53-SLP 型倒置相差显微镜(日本Olympus公司)，TS2R-LS型荧光倒置显微镜(日本Nikon公司)，TD-5Z型低速离心机(四川蜀科仪器有限公司)等。

    1.2 主要药品与试剂

    紫花地丁药材(批号2001004)购自亳州市远光中药饮片厂，由西南医科大学药学院中药资源与鉴定教研室庄元春副教授鉴定为真品。

    秦皮乙素对照品(批号5483，纯度99.3%)购自上海诗丹德生物技术有限公司；无水乙醇、过硫酸钾、抗坏血酸(批号20190528，纯度99.7%)均购自成都金山化学试剂有限公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)、2-苯基-4，4，5，5-四甲基咪唑啉-3-氧代-1-氧(2-phenyl-4，4，5，5-tetramethylimidazoline-3-oxide-1-oxyl，PTIO)(批号分别为BTSJ18X80、BTSJ2020-0602)均购自成都润泽本土化工有限公司；2，2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2，2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic) acid ammonium salt ......