余星霖，杨丽萍，陈普，段小花(云南中医药大学云南省傣医药与彝医药重点实验室，昆明 650500)

    线粒体在维持大脑活动中发挥着重要作用，不仅是神经细胞的主要能量来源，还参与神经细胞凋亡、产生活性氧(reactive oxygen species，ROS)、调节能量代谢和维持钙平衡等生理调节[1]。线粒体功能障碍会导致许多神经类疾病，如：脑缺血再灌注损伤、阿尔茨海默病、亨廷顿病和帕金森病等[2]。因此，针对线粒体功能障碍，防止线粒体损伤对治疗神经类疾病具有重要意义。

    近年来，从中药中获取具有线粒体靶向功能的活性成分已成为研究热点[3]。天麻为兰科植物天麻Gastro‐dia elataBl.的干燥块茎，具有抗氧化应激、抗衰老、改善记忆障碍、抗抑郁等药理作用，用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病、癫痫、抑郁症、脑缺血损伤等疾病[4]。目前，在天麻中发现了近百种化合物，包括酚类(如天麻素、对羟基苯甲醇)、有机酸类(如巴利森苷)、甾体类(如β-谷甾醇)等[5]。实验研究表明，天麻素、巴利森苷等可发挥抗氧应激、抑制细胞凋亡、保护神经细胞的作用[6]。然而，对天麻改善线粒体功能的活性成分尚未确定，这严重限制了其神经保护机制的进一步研究。

    近年来，有研究者基于超滤离心和高效液相色谱(HPLC)-质谱联用的方法获取靶向肝脏、心脏中线粒体的中药活性成分，并通过药理实验证明所获取成分具有活性作用[7―8]，这是从复杂成分中高效获取线粒体靶向化合物的有效方法。基于天麻中主要成分已基本被鉴定，本课题组利用超滤离心选择性分离与脑线粒体结合的天麻成分，并采用HPLC法分析鉴定；最后，通过缺氧缺 糖/复 氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R)细胞实验研究所得化合物的神经保护活性。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器有DMi1型倒置生物显微镜(上海徕卡仪器有限公司)、FD-1A-50型冷冻干燥机(北京博医康实验仪器有限公司)、VariosKan型全波长扫描式多功能酶标仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]、1260型HPLC仪(美国Agilent公司)、ST60-4型微孔板恒温振荡器(杭州米欧仪器有限公司)等。

    1.2 主要药品与试剂

    天麻粉由云南省傣医药与彝医药重点实验室提供，经云南省傣医药与彝医药重点实验室尹子丽副教授鉴定为兰科植物天麻G.elataBl.的干燥块茎粉末。对照品对羟基苯甲醇(p-hydroxybenzyl alcohol ......