黄倩，郑丹丹，黄秋虹，施子禄(.泉州医学高等专科学校基础医学部生理教研室，福建 泉州 3600；.福建医科大学附属泉州第一医院肾内科，福建 泉州 36000)

    糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是一种糖尿病引起的以肾间质发生纤维化为核心病理特征的微血管病变，也是导致糖尿病患者康复率低的重要原因之一[1]。已有研究证实，肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是诱导肾间质发生纤维化的关键步骤之一[2]。锌指转录因子1(Snail family transcriptional repressor 1，Snail1)和卵泡抑素样蛋白1(follistatin-like protein 1，Fstl1)、蛋白激酶B(pro‐tein kinase B，Akt)均在EMT中发挥重要作用[3-4]。

    香豆素类衍生物蛇床子素(osthole，OST)广泛分布于伞形科植物蛇床子中，在抗心肌纤维化[5]和肝脏纤维化[6]方面均有一定作用。本课题组前期研究发现，OST能有效预防单侧输尿管梗阻模型小鼠的肾间质纤维化[7]，在此基础上，OST在其他肾损伤中，特别是对DN肾间质纤维化是否仍有预防作用值得进一步研究。本研究选用OST对DN模型小鼠进行预防性给药，观察其对小鼠肾间质纤维化的影响，并对Fstl1/Akt/Snail1通路中的关键蛋白进行测定，旨在为临床筛选DN防治药物提供新的思路。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器包括逸智F型罗氏逸智血糖仪(德国罗氏诊断有限公司)，5810R型高速冷冻式离心机(德国Eppendorf公司)，UVmini-1240型紫外-可见分光光度计(日本岛津国际贸易上海有限公司)，VE-180型垂直电泳仪和Tanon-3500型全自动凝胶成像仪(上海天能科技有限公司)。

    1.2 主要药品与试剂

    OST(纯度≥95%，批号78889)和链脲佐菌素(纯度≥98%，批号S0130)均购于美国Sigma公司；肌酐检测试剂盒和尿素氮检测试剂盒(批号分别为700460-2、SKT-213-192)均购于武汉艾美捷科技有限公司；尿蛋白检测试剂盒(批号GD-VN9853)购于上海古朵生物科技有限公司；Masson三色染色试剂盒(批号16071)购于上海源叶生物科技有限公司；E-钙黏蛋白(E-cadherin)免疫组化检测试剂盒(批号GOY-Y1007)购于上海谷研实业有限公司；波形蛋白(vimentin)免疫组化检测试剂盒(批号US-132)购于上海研生生化试剂有限公司；兔抗大鼠Fstl1、Snail1、vimentin、Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、β-肌动蛋白(β-actin)多克隆抗体和小鼠抗大鼠E-cadherin单克隆抗体(批号分别为ab232777、ab82846、ab137321、ab235958、ab8932、ab8227、ab76055)均购于英国Abcam公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔、小鼠免疫球蛋白G二抗(批号分别为A0208、A0216)均购于上海碧云天生物技术有限公司；其余试剂均为实验室常用规格 ......