司徒莹 ，程婉秋 ，沈志滨 ，陈艳芬 ，唐春萍 ，陈聪 ，江涛 (.广东药科大学中药学院，广州 50006；2.广东药科大学实验动物中心，广州 50006；.广东省局部精准药物递药制剂工程技术研究中心，广州50006)

    黄草乌为毛茛科植物黄乌头Aconitum vilmorini‐anum Kom.的干燥块根[1]，有剧毒，收载于2005年版《云南省中药材标准》中。黄草乌具有祛风散寒、除湿止痛的功效，临床用于治疗跌打损伤、风湿痛、手足厥冷等[2]。乌头属植物对心脏有明显毒性，能诱发不同类型的心律失常。其含有的乌头属类生物碱是主要的毒性成分，其中以乌头碱最具代表性[3]。黄草乌同属乌头属植物，其生品中所含的双酯型二萜生物碱(如滇乌碱)与乌头碱的结构相似[4]。滇乌碱是黄草乌的主要活性成分之一，但同时也是其主要毒性成分之一[5]。本课题组前期研究结果显示，黄草乌经炮制后对心脏的毒性明显降低，这与黄草乌炮制后滇乌碱含量显著降低有关[5―6]。相关研究表明，滇乌碱引起大鼠心律失常的毒性作用可能与其降低了心肌细胞线粒体能量代谢和引起了钙超载有关[7]；并且，滇乌碱还可抑制H9c2心肌细胞活性，破坏心肌细胞膜的稳定性，诱导心肌细胞凋亡[8]。但关于滇乌碱致大鼠心肌损伤与线粒体凋亡途径的相关性尚未明确。

    细胞凋亡又名细胞程序性死亡，是维持机体正常新陈代谢的一种正常的生理过程。心肌细胞为高度分化的终末细胞，不具有再生能力，而过度凋亡可造成心肌细胞持续丧失，使心肌发生结构性病变[9]。现有研究表明，细胞凋亡的线粒体途径是指由于线粒体受到氧化应激、钙超载、DNA损伤等多种刺激启动凋亡程序，激活多种转录因子而引起的细胞凋亡[10]。本文基于现有研究，通过线粒体途径探究滇乌碱导致大鼠心肌细胞凋亡的机制，从而揭示滇乌碱引起大鼠心肌损伤的可能毒性机制，以期为黄草乌及其活性成分的临床安全使用提供实验依据。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用的主要仪器有：VARIOSKAN型多功能微孔板读数仪[赛默飞世尔科技(中国)有限公司]，Bio-Rad型电泳仪、电转系统(Mini型蛋白电泳系统)、UV1300/1500型紫外-可见分光光度计[美析(中国)仪器有限公司]，URIT-8021A型全自动生化分析仪(桂林优利特医疗电子有限公司)，LG2000型数码凝胶图像分析系统(杭州朗基科学仪器有限公司)，Infinite 200 PRO型多功能荧光酶标仪(奥地利Tecan Austria GmbH公司)，BX51型荧光显微镜(日本Olympus公司) ......