白皓天，杨婧，李娅兰，牛捷，张翔珂，张筠昊，梁霄，王锐，(.黑龙江中医药大学药学院，哈尔滨 50040；.黑龙江中医药大学基础医学院，哈尔滨 50040；.教育部北药基础与应用研究重点实验室，哈尔滨 50040)

    肝癌是较为常见的原发恶性肿瘤之一，具有发病率、病死率较高和预后差等特点，是目前人类难以攻克的病症之一[1]。红花多糖(safflower polysaccharide，SPS)是中药红花Carthamus tinctoriusL.的主要活性成分之一，与化疗药物联用有增强后者疗效、降低后者毒副作用的效果[2-3]；同时有研究证实，SPS能通过调控细胞凋亡和细胞周期来发挥对胃癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤细胞增殖的抑制作用[4]。磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositide 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase B，Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)通路是肝癌细胞内的重要信号通路，其相关蛋白异常将导致通路功能改变，从而影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和侵袭[5]。研究表明，自噬可促进肿瘤细胞凋亡或坏死，与肿瘤的发生发展密切相关[6]。SPS具有诱导肝癌细胞凋亡的作用[2]，但其能否通过调节自噬来抑制肿瘤的发生发展及具体作用机制尚不清楚。为此，本研究以人肝癌细胞作为研究对象，研究SPS对其自噬与凋亡的影响，初步探讨SPS抗肝癌的潜在作用机制，以期为临床治疗提供理论支持。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器包括Friocell 22型CO2恒温培养箱(德国Mmm Group公司)，Infinite 50型酶标仪(美国BioTek公司)，DYCZ-2DN型电泳仪、WD-9423B型化学发光分析仪(北京六一生物科技有限公司)，BD Accuri C6型流式细胞分析仪(美国BD公司)，CKX41型光学显微镜(日本Olymypus公司)，EOS 700D型数码相机(日本Canon公司)，DMi1型荧光倒置显微镜(德国Leica公司)等。

    1.2 主要药品与试剂

    红花药材(批号200301)购自黑龙江雪灵峰中药饮片有限公司，经黑龙江中医药大学中药药剂教研室王锐教授鉴定为菊科红花属植物红花C.tinctoriusL.的干燥花。

    DMEM培养基(批号10-013-CVRC)购自美国Corning公司；胎牛血清(批号04-007-1A)购自以色列Biological Industries公司；MTT试剂(批号M8180)购自北京索莱宝科技有限公司；Hoechst 33258染液、Beyo ECL Plus试剂(批号分别为C1017、P0018S)均购自碧云天生物技术有限公司；苏木精-伊红(HE)染液(批号Top 0046)购自北京博奥拓达科技有限公司；BCA总蛋白定量测定盒(批号A045-4-2)购自南京建成生物工程研究所；AO染色试剂盒、Annexin Ⅴ-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒(批号分别为I314FA0005、TE55AA6547)均购自生工生物(上海)股份有限公司；兔源β-肌动蛋白(β-actin)、Bax、Bcl-2、胱 天 蛋 白酶 9(caspase-9)、剪切 的 caspase-3(cleaved caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3(microtubuleassociated protein 1 light chain 3 ......