肖玉洪，安祯祥(1.贵州中医药大学第一临床医学院，贵阳 55000；.贵州中医药大学第一附属医院消化内科，贵阳 550001)

    肝纤维化是由各种致病因子导致慢性肝损伤的病理性修复过程，细胞外基质过度沉积是其主要病理特征。肌成纤维细胞是产生细胞外基质的核心细胞，而肝细胞、肝星状细胞和胆管上皮细胞可通过上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)为肌成纤维细胞[1]。近年来研究发现，EMT可促进肝纤维化的发生发展，但EMT过程是可逆的，抑制细胞EMT过程，能减缓甚至逆转肝纤维化进程[2]。这使得逆转EMT成为抗肝纤维化的潜在策略。

    柠檬苦素是一种三萜类化合物，也是橙子和柠檬种子以及果皮中的主要活性成分，具有保肝、抗肝癌、抗炎等药理作用[3]。有研究表明，柠檬苦素可通过转化生长因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)/Smad信号通路来逆转博来霉素诱导的肺组织EMT过程，减轻小鼠的肺纤维化[4]。为探究柠檬苦素对肝纤维化的改善作用，以及其抗肝纤维化作用是否与调控EMT相关，本研究以四氯化碳(CCl4)造模法构建肝纤维化大鼠模型，观察柠檬苦素对大鼠肝纤维化的影响，并基于EMT角度，初步探讨其可能的作用机制，旨在为柠檬苦素的药理研究与开发利用提供参考。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器有DM500型光学显微镜(德国Leica公司)、TGL-20M型台式高速冷冻离心机(长沙高新开发区湘仪贝克仪器仪表有限公司)、EPS-300型电泳仪(上海天能科技有限公司)、RS-25S型超声波细胞粉碎机(宁波荣顺科技仪器厂)、EL10A型自动酶标仪(博科控股集团有限公司)、Mini-PROTEAN Tetra Electrophoresis System型蛋白电泳槽和Mini Trans-Blot型蛋白转印系统(美国Bio-Rad公司)、LIDE 200型扫描仪(日本Canon公司)等。

    1.2 主要药品与试剂

    柠檬苦素对照品(批号NMKS2021081，纯度99.58%)购自南京春秋生物工程有限公司；秋水仙碱片(批号201202，规格0.5 mg)购自西双版纳版纳药业有限责任公司；CCl4(批号20181008，纯度≥99.5%)购自天津市大茂化学试剂厂；透明质酸(hyaluronic acid，HA)、层粘连蛋白(laminin，LN)试剂盒(货号分别为RA20032/20211010、RA20606/20211010)均购自武汉贝茵莱生物科技有限公司；丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase ......