廖太阳 ，张力 ，杨楠 ，魏义保 ，吕璟先 ，徐波 ，丁亮 ，王培民 ，张立 (.南京中医药大学附属医院/江苏省中医院骨伤科，南京 009；.南京中医药大学附属苏州市中医医院骨伤科，江苏 苏州 5007)

    膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)是一种全关节疾病，该病病因复杂，软骨退变是其核心病理环节[1]。软骨退变主要是由于软骨细胞合成代谢及细胞外基质(extracellular matrix，ECM)分解代谢平衡失调所致，因此，维持软骨组织自身的代谢平衡在KOA的治疗中具有十分关键的作用，对于延缓KOA发展进程至关重要[2]。研究显示，以血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4(disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4，ADAMTS-4)、ADAMTS-5、基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinase3，MMP-3)、MMP-13为代表的胶原水解酶，对关节软骨具有破坏作用[3—4]；而聚集蛋白聚糖(Aggrecan)对关节软骨具有保护作用[5—6]。另外，越来越多的研究表明，调控腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)信号通路对软骨具有保护效应[7—9]。

    基于KOA中医学“寒、瘀、虚”的病机特点，南京中医药大学附属医院骨伤科王培民教授研制了中药复方——膝痹宁方(XBN)，该方由制狗脊、山萸肉、生薏苡仁、川牛膝、制何首乌、生甘草等11味中药组成，且已获国家专利(专利号为CN201010514325)，在临床上主要用于治疗骨关节退行性疾病导致的慢性疼痛，疗效显著[10—11]。本课题组前期研究也发现，XBN可改善KOA模型大鼠的滑膜炎症和疼痛[12]，但具体作用机制尚不明确。基于此，笔者拟基于AMPK/mTOR信号通路探讨XBN改善KOA的作用机制，以期为XBN的临床应用提供实验基础。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器包括AB7500型荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)系统(美国ABI公司)，HistoCore型组织切片机、TP1020型组织脱水机、KD-BMⅢ型组织包埋机、MI-3000B型倒置显微镜(德国Leica公司)，BioPhotometer-Plus型多功能核酸蛋白检测系统(德国Eppendorf公司) ......