壮药三七姜醇提物及含药血清对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抗炎作用及机制 Δ
培养基,1材料,1细胞株,2实验动物,3主要仪器,4主要药品与试剂,2方法,1三七姜醇提物的制备,2三七姜醇提物大鼠含药血清的制备,3细胞培养,4细胞分组,造模与培养,5细胞活
梁洁 ,梁晶春 刘星晨 陈晓思 曹玉嫔 陈俊 柳贤福 ,李耀华 朱华 (.广西中医药大学药学院,南宁 53000;.广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室,南宁 53000;3.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心华南分中心,南宁 53000;.广西中医药大学赛恩斯新医药学院,南宁 530)三七姜是姜科姜七属植物姜三七Stahlianthus invo‐lucratus(King ex Bak.) Craib.的块根和根茎,收录于《广西壮族自治区壮药质量标准》(第二卷),其别名为小田七、竹田七、姜三七等[1],是广西民族民间药,既可用于跌打损伤、风湿骨痛、吐血衄血、月经过多,还能外用治虫蛇咬伤、外伤出血[2]。本课题组前期研究发现,三七姜醇提物可以明显抑制二甲苯所致的小鼠耳郭肿胀、醋酸引起的小鼠毛细血管通透性增加和小鼠棉球肉芽肿增生[3]。进一步研究发现,原儿茶酸、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲醛可能是三七姜发挥抗炎的物质基础[4]。但其具体抗炎作用机制尚不明确。
Toll样受体(Toll?like receptors,TLRs)是天然免疫系统中一类保守的模式识别受体,在外界病原体刺激下可激活下游炎症信号通路[5]。TLR4是TLRs家族中的重要成员,在炎症反应发生过程中具有重要作用,核因子κB(nuclear factor?κB,NF?κB)作为TLR4信号通路的下游效应因子,在病理条件下,TLR4激活会导致细胞内NF?κB信号转导并产生炎症细胞因子而引发炎症反应[6]。但三七姜是否可通过TLR4/NF?κB信号通路发挥抗炎作用,尚不明确。
三七姜所含化学成分多样,其口服给药后,理论上可被吸收入血,进而在人体内循环抵达靶点,当达到一定浓度时可产生相应药理作用[7]。基于此,本研究先将三七姜灌胃给予大鼠,再取其血清;采用脂多糖(lipo‐polysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7,建立体外炎症细胞模型,进而考察三七姜醇提物和含药血清对RAW264.7细胞的炎症因子释放及TLR4/NF?κB信号通路的影响,初步探索和完善三七姜的抗炎作用机制。
1 材料
1.1 细胞株
小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7购于中国科学院上海生科院细胞资源中心。
1.2 实验动物
本研究所用动物为SPF级Waster大鼠,雄性(性别对本研究无影响),体质量(200±10) g,购自湖南斯莱克莱克景达实验动物有限公司,动物生产许可证号为SCXK(湘)2019?0004 ......
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