林映雪 ，崔海鹏 ，王领弟 ，杨昌硕 ，庄朋伟 #(.承德医学院附属医院药学部，河北 承德 067000；.承德医学院病理生理学教研室，河北 承德 067000；.天津中医药大学中药学院，天津 009)

    上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是上皮细胞失去极性，并转化成间质细胞表型的过程。EMT可破坏上皮屏障功能的完整性，诱发恶性肿瘤组织的上、下皮细胞转化成间质细胞，使细胞间连接(紧密连接、黏附连接、桥粒/半桥粒等)解体，导致细胞表面的上皮标志物[如E-钙黏蛋白(E-cadherin)、细胞角蛋白、紧密连接蛋白1(Zona occludens 1，ZO-1)等]表达水平逐渐降低，而间充质标志物[如N-钙黏蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(vimentin)、纤连蛋白等]表达水平升高，最终使肿瘤细胞具备转移和侵袭能力[1—2]。因此，抑制肿瘤细胞EMT，改善上皮屏障功能，可能是治疗肿瘤的有效靶点。

    传统中医药具有靶点多、副作用少的特点，近年来有关其在治疗肿瘤方面的研究愈加深入。中医认为肿瘤发生的病因之一为“正气内虚”，正不抗邪，邪气经人体三焦、腠理等通道，四处侵染[3]，即出现肿瘤的转移和侵袭。玉屏风散由黄芪、白术、防风3味药组成，是补气固表的经典方剂，目前其制剂有丸剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液等多种剂型[4]。研究表明，玉屏风散及其各组分可通过提高机体免疫功能、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、减缓肿瘤细胞侵袭和转移等起到防治肿瘤的作用[5]。但是关于玉屏风散对肿瘤细胞EMT 及上皮屏障功能完整性影响的研究较少。鉴于此，本研究基于Lewis 荷瘤小鼠自发肺转移模型，以玉屏风颗粒为受试药物，对上述问题进行探讨，为进一步研究玉屏风散及其相关制剂防治肿瘤的机制提供参考。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用的主要仪器有Ⅸ53型倒置显微镜、Ⅸ71型显微镜图像采集系统(日本Olympus 公司)，CFX96 Touch型实时定量PCR仪、Amersham Imager 600型凝胶检测成像系统(美国Bio-Rad公司)。

    1.2 主要药品与试剂

    玉屏风颗粒(批号200213，规格5 g/袋)购自国药集团广东环球制药有限公司；辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)(H+L)抗体(批号A0208、A0216)均购自上海碧云天生物技术有限公司；Carazzi 苏木素染色液(批号G4510)、伊红染色液(批号G1100)、免疫组化试剂盒(批号SA00011)均购自北京索莱宝科技有限公司；兔源癌胚抗原检测抗体(批号A12421)、兔源E-cadherin单克隆抗体(批号A3044)均购自武汉爱博泰克生物科技有限公司；兔源β-连环蛋白(β-catenin)多克隆抗体(批号51067-2-AP)、兔源vimentin多克隆抗体(批号10366-1AP)均购自美国Proteintech公司；RNAprep pure动物组织总RNA提取试剂盒(批号DP431)、FastQuant cDNA 第一链合成试剂盒(批号KR106)、SuperReal PreMix SYBR Green qPCR检测试剂盒(批号FP204)均购自天根生化科技(北京)有限公司 ......