尹硕鑫，敖先伟，李 博，张 涛，陈远能#(1.南阳市中心医院，河南 南阳 7000；.荆州市第二人民医院消化内科，湖北 荆州 000；.南阳市中心医院呼吸内科，河南 南阳 7000；.广西中医药大学附属瑞康医院消化内科，南宁 50011)

    胃癌是全球第五大常见癌症[1]，全球每年约有100万人诊断为胃癌，其中约40%的新发病例和死亡病例发生在中国[2]。目前，胃癌的主要治疗方法包括手术和放化疗，但术后复发率高，并且晚期胃癌患者化疗后5年生存率低于5%[3]。中医药作为我国医疗事业中不可或缺的一部分，不仅能提高化疗药的疗效、减少副作用、提高患者生活质量，还能减慢肿瘤生长速度、缓解临床症状，在肿瘤患者治疗中的应用也日益广泛。

    清热化湿方为经典方“藿朴夏苓汤”加黄连、栀子化裁而成。藿朴夏苓汤出自清代的《医原》，能宣通气机、燥湿利水[4]。本课题组前期研究证实，清热化湿方能够防治幽门螺杆菌感染相关的胃癌[5—6]。近年来miRNA与胃癌的关系被广泛报道。本课题组前期通过基因芯片分析发现，胃癌组织中的miRNA-155 会被明显下调[7]，且稳定沉默miRNA-155 可促进胃癌的进展[8]。此外，有研究显示，miRNA能够通过调节Wnt/β-catenin信号通路参与调控胃癌细胞的生物学行为[9]。基于此，本研究通过构建胃癌荷瘤裸鼠模型探讨清热化湿方是否能够通过干预miRNA-155 抑制Wnt/β-catenin 信号通路中Wnt7、β-catenin、T 细胞因子4(T-cell factor-4，TCF-4)表达进而治疗胃癌，以期为清热化湿方的临床应用提供依据。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    IX71 型荧光倒置显微镜购自日本Olympus 公司；RM2135 型切片机购自德国Leica 公司；3K15 型低温冷冻离心机购自德国Sigma 公司；Mini Protean 3 Cell 型电泳仪购自美国BioRad公司；MK3型酶标仪、ChemiScope 5300 Pro 型一体式化学发光成像仪均购自美国Thermo Fisher Scientific公司。

    1.2 药品与试剂

    清热化湿方(包括藿香6 g、白豆蔻1.8 g、淡豆豉9 g、川厚朴3 g、姜半夏4.5 g、杏仁9 g、赤茯苓9 g、猪苓4.5 g、泽泻4.5 g、生薏苡仁12 g、黄连12 g、栀子12 g)购自广西中医药大学附属瑞康医院。过表达miRNA-155 慢病毒由汉恒生物科技(上海)有限公司构建；DMEM高糖培养基、胎牛血清(批号分别为SH30022.01、SH30406.05)均购自美国HyClone 公司；青链双抗(批号E607011)购自生工生物工程(上海)股份有限公司；嘌呤霉素、Trizol RNA 提取试剂、SYBRGreen PCR 试剂盒、逆转录试剂盒(批号分别为A1113803、15596026、F-415XL、K1622)均购自美国Thermo Fisher Scientific 公司；0.25%胰蛋白酶(批号C0201)购自上海碧云天生物技术有限公司；BCA蛋白定量试剂盒(批号BL521A)购自广州硕谱生物科技有限公司；磷酸盐缓冲液(PBS ......