李茹冰 ，李伟达 ，刘文婷 ，李宇璐 ，谷小红 ，于丽娟 ，万华印 (.中国科学院大学深圳医院药学部，广东深圳 5807；.佛山市妇幼保健院药剂科，广东 佛山 58000；.广州市众为生物科技股份有限公司，广州 5000)

    纤维蛋白类止血敷料主要含有纤维蛋白原和凝血酶成分，可模拟人体凝血过程的最后一步，其相关止血生物制剂可通过形成不溶性纤维蛋白而实现伤口的快速封闭[1—2]。临床现有止血制剂多以纤维蛋白类止血辅料为黏合剂，在使用时须提前将纤维蛋白原和凝血酶分别溶解，再利用双针筒混合装置喷洒至创面而成胶止血[3]。然而，这种须提前溶解且须配合使用特殊装置的制剂可能会导致危急手术患者错失最佳的止血时机；同时，由于黏合剂自身的机械强度不足[4]，若医护人员在喷洒后立即使用纱布吸取伤口周边渗血，则可能会因纱布擦拭掉未成胶的止血物而导致制剂失效。为此，本课题组自主研制了猪源纤维蛋白贴(porcine fibrin patch，简称“DBT”)，即以从猪血浆中提取的纤维蛋白原和凝血酶，以及从猪跟腱中提取的胶原蛋白为原料，通过特殊工艺处理并冻干而制得的海绵片剂[5]。该DBT具有海绵样蛋白骨架结构，无须预配，遇血即可形成纤维蛋白；加之其外层为胶原蛋白，能有效防止制剂与纱布或周围结缔组织粘连，故可通过生化止血和机械按压止血相结合的方式实现快速止血[6]。目前上市的蛋白贴剂仅有人源性TachoComb?(奥地利Nycomed公司)、TachoSil?(日本Takeda公司)、Evarrest?(美国Johnson & Johnson公司)等品种[7—8]，尚无猪源性同类制剂。

    根据本课题组前期动物实验和国内外临床应用研究，纤维蛋白类止血制剂的用量需根据创面大小和止血情况叠加使用，且止血物需在体内降解，故其量效关系主要体现于制剂的成分组成及含量[9—10]。为更直观地显示DBT的内在量效关系，本文运用了Box-Behnken-响应面设计方法，以DBT的黏合强度、持黏力和吸水力3个与止血性能密切相关的力学参数为检测指标[11—12]，以其总评归一化(overall desirability，OD)值为响应值，对冻干前纤维蛋白原、凝血酶和胶原蛋白3个主要有效成分的含量进行优化，以保障DBT止血效果的充分发挥，也为同类产品的研究开发提供参考。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器包括BLD-1028型剥离强度试验机、BLD-1008A型保持力测试仪(东莞博莱德仪器设备有限公司)，GLZY-1型冻干机(上海浦东冷冻干燥设备有限公司) ......