魏义保 ，马振源 ，廖太阳 ，杨楠 ，吴鹏 ，王培民 ，2，黄正泉 #(.南京中医药大学附属医院/江苏省中医院骨伤科，南京 20029；2.江苏省中医外用药开发与应用工程研究中心，南京 20023)

    膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)是常见的慢性退行性疾病，好发于中老年人群，且致残率较高。随着人口老龄化的加剧，全球症状性KOA的患病率已达3.8%，成为亟待解决的公共卫生问题之一[1]。KOA是一种全关节疾病，其发病与关节软骨及软骨周围组织的病理变化(如关节软骨破坏、软骨下骨改变和骨赘形成等)有关[2]。研究表明，滑膜病变在KOA的发病过程中具有重要作用。滑膜炎症可能是KOA的始动环节，在滑膜炎症的晚期通常伴随着滑膜纤维化(synovial fibrosis，SF)的发生，后者以胶原异常重塑、纤维结缔组织聚集和细胞外基质(extracellular matrix，ECM)沉积为主要表现，被认为是患者膝关节僵硬、功能障碍的重要原因[3]。

    “易层”贴敷是由全国名老中医诸方受教授在传统中医贴敷疗法的基础上，结合多年临床经验研制出的新型中医外治方法。该贴敷共有两层，第1层复方三黄油膏含黄柏、黄芩、大黄3味凉性中药，可直接敷于患者皮肤；第2层三色散则由当归、川牛膝等温经活血类中药组成，性温燥，具有活血、通络、止痛之功；两层中药相辅相成，且可根据患者寒热证型灵活调整用量，改善KOA患者的膝关节疼痛和活动受限等症状的疗效较好[4-5]。本课题组前期研究发现，“易层”贴敷不仅能够缓解KOA模型大鼠的滑膜炎症和关节疼痛，还具有抑制SF的作用，上述作用可能与该贴敷能够抑制高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1，HMGB1)表达、维持促炎-抑炎因子动态平衡有关[6]。HMGB1是一种参与炎症反应的多功能蛋白，HMGB1/Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB，NF-κB)信号通路与炎症及纤维化的发生密切相关[7]，故本课题组推测“易层”贴敷抑制KOA患者SF的作用可能与该通路有关。基于此，本研究拟基于HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路探讨“易层”贴敷对KOA模型动物SF的干预机制，旨在为“易层”贴敷的临床应用提供依据。

    1 材料

    1.1 主要仪器

    本研究所用主要仪器包括ABI 7500型实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)仪(美国ABI公司)、170-3930型凝胶电泳及转膜仪(美国Bio-Rad公司)、LAS 4000型凝胶成像发光系统(美国GE公司)、ELX 800型酶标仪(美国BioTek公司)等 ......