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编号:12358646
CD133和缺氧诱导因子—1α在人脑胶质瘤中的表达及意义
http://www.100md.com 2013年2月1日 孔令军等
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    参见附件。

     【摘要】目的:探讨脑肿瘤干细胞标记物CD133、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人脑胶质瘤中的表达情况,分析两者的关系及其意义。方法:应用免疫组化方法分析66例人脑胶质瘤中的CD133、HIF-1α的表达情况。结果:脑肿瘤干细胞标记物CD133,HIF-1α在正常脑组织中未见表达,在低级别脑胶质瘤中低表达,在高级别脑胶质瘤中高表达,各组之间表达有显著性差异(P < 0.05)。CD133表达与HIF-1α表达之间有相关性,两者呈正相关( P < 0.05)。结论:CD133和HIF-1α表达呈正相关性,两者与人脑胶质瘤的病理分级呈正相关。

    【关键词】CD133;缺氧诱导因子-1α;胶质瘤 ;免疫组化

    【中图分类号】R453【文献标识码】B【文章编号】1004-4949(2013)02-0001-03

    人脑胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤,易复发,浸润性生长,手术、放疗、化疗等均难以根除,致其预后较差。近年来有研究表明,CD133蛋白阳性表达的肿瘤干细胞是一种具有肿瘤再生潜能的细胞,具有自我更新和多向分化的特征,是肿瘤侵袭性生长、复发及转移的根源[1]。缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)是调节肿瘤细胞缺氧反应的主要转录因子,研究发现在多数恶性肿瘤均有表达,并与恶性肿瘤新生血管的生成有关[2]。本研究通过免疫组织化学的方法,检测脑肿瘤干细胞标记物CD133、HIF-1α在不同病理级别的脑胶质瘤中的表达情况。探讨人脑胶质瘤中CD133、HIF-1α蛋白的表达在肿瘤的侵袭性生长、复发及转移中的作用,为判断预后提供临床指导,并为胶质瘤的侵袭性生长、复发及转移机制的研究提供帮助。

    1 资料与方法

    1.1病例资料: 研究对象为河北省沧州中西医结合医院神经外科2005 年5月~2011 年6 月住院手术切除且保存完好的胶质瘤组织的石蜡包埋标本,临床资料完整,男性36例,女性30例,脑胶质瘤组织学分析根据2000年修改的WHO神经系统肿瘤分级标准对其进行组织学的分类分级,其中I级10例, II级20例, III级16例、IV级20例,包括星形胶质细胞瘤42例,节细胞胶质瘤1例,脉络丛乳头状瘤5例,少突胶质细胞瘤11例,室管膜瘤5例,髓母细胞瘤2例。男38例,女28例,年龄3-64岁,中位年龄43岁。另取沧州中西医结合医院神经外科因颅脑损伤行内减压术患者8例正常脑组织作对照,所有胶质瘤患者术前均未接受过化疗或放疗等辅助治疗。所有标本经10%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,4微米厚切片编码备用。

    1.2 主要试剂: 兔抗人CD133单克隆抗体(浓缩型)购自博士德公司,鼠抗人HIF-1α抗体(浓缩型)购自北京中杉生物技术有限公司, SP免疫组化染色试剂盒购自河北博海生物公司,DAB试剂盒、PBS缓冲液和柠檬酸盐抗原修复液,均购自北京中杉生物技术有限公司。

    1.3 免疫组织化学染色: 石蜡切片常规脱蜡水化,蒸馏水漂洗3min,切片置0.01mol/L,枸橼酸缓冲液(PH6.0)中用煮沸(95℃,15-20min)进行抗原修复,自然冷却20min以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温。取出切片,蒸馏水冲洗两次,每次3min,用0.01 mol/LPBS液冲洗2次共5min。使用3%双氧水阻断灭活内源性过氧化物酶,CD133一抗稀释度为1:200,HIF-1α一抗稀释度1:150,按照试剂盒说明进行操作(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照),甩去PBS液,每张片滴加2滴新配制的DAB溶液(按说明书配制),3-5min后显微镜下观察显色情况。蒸馏水充分冲洗,苏木精轻度复染1min,常规脱水,透明,干燥,封片。

    1.4 结果判定: CD133染色阳性标准:以细胞膜中出现突出于背景的棕黄色颗粒为阳性。HIF-1α染色阳性标准:以细胞核中出现浅黄色、棕色、棕褐色颗粒为阳性。低倍和高倍镜下观察并在高倍镜(400X)下随机选择5个视野 ......

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