含PTD结构域的MAGE—A3融合蛋白表达、纯化及生物学功能的初步研究(2)
2.3 293T细胞的培养及融合蛋白的细胞穿膜效应的观察：：293T细胞常规培养于37℃、5%的C02培养箱、加入10%FBS的 DMEM培养液，加入青、链霉素至终浓度为100 mg/L。收集培养至第4天的293T细胞 1×106cells/ml，2ml/孔，分别加入TAT-MAGE-A3-EGFP、MAGE-A3-EGFP和TAT-EGFP三组融合蛋白各50μg/ml，以及培养基DMEM共同孵育2h，利用尼康Ti-E动态显微观察系统，选择30分钟，90分钟，120分钟时间点连续观察融合蛋白的细胞跨膜情况。2h后PBS洗涤细胞，利用流式细胞仪检测细胞的荧光强度。
3 结果
3.1 pET28a-TAT-MAGE-A3-EGFP、pET28a-MAGE-A3-EGFP和pET28a-TAT-EGFP原核表达载体的构建及鉴定
构建的pET28a-TAT-MAGE-A3-EGFP、pET28a-MAGE-A3-EGFP分别用NheⅠ和XhoⅠ和pET28a-TAT-EGFP质粒用BamHⅠ和XhoⅠ进行双酶切鉴定 ......
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