胶质细胞源性神经营养因子基因克隆及表达载体的构建(3)
大肠杆菌表达系统是较为常用的一种。其优点是遗传背景比较清楚，表达水平较稳定，易操作，有许多菌株突变体和含强启动子的载体可供选择，并且成本低、蛋白表达量高、容易纯化等。在重组质粒的构建中，本实验是通过化学法将GDNF和质粒连接反应液转化JM109感受态，感受态是本实验室通过CaCl2法制备获得，将PCR阳性单菌落挑至新鲜的LB液体培养基中过夜培养，第二天将菌液送西安交通大学法医学司法鉴定中心代为测序，结果表明片段为630bp，与文献报道一致，且未发生突变。本研究成功扩增大鼠GDNFcDNA基因，并成功构建重组质粒pEGFP-GDNFcDNA，经双酶切及测序证明与文献报道一致，未发生异常突变 ......
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