柴胡汤剂中次生柴胡皂苷结构研究(1)
[摘要]目的：研究柴胡煎煮过程中新生成的柴胡次生皂苷的结构。方法：采用各种分离技术和光谱技术对柴胡煎液中柴胡皂苷的结构进行分离和结构鉴定。采用HPLC对所分离得到的柴胡皂苷进行指认。结果：从柴胡汤剂中分离得到11个柴胡皂苷，对柴胡煎煮过程中新生成的7个成分中的4个进行了指认。结论：为从次生柴胡皂苷的角度完善柴胡的认识奠定基础。
[关键词]柴胡；汤剂；次生柴胡皂苷
汤剂是中医临床用药的主要形式，汤剂中所含有的化学成分是中药发挥疗效的主要物质载体。因此，中药(复方)有效成分的研究应严格按照中药传统用药方式，重点对其水煎剂进行全面系统研究[1]。这对于那些含有结构不稳定、在煎煮过程中已发生结构转变成分的中药的研究尤其应该注意，例如，柴胡。研究[2]中发现，柴胡煎煮后出现了7个药材中不存在的新色谱峰，是柴胡汤剂中存在的主要皂苷类成分(次生柴胡皂苷)，是柴胡发挥疗效的重要物质基础，然而人们对于该类成分的认识较少。基于此，本文以柴胡汤剂中新出现的成分为研究对象，对其结构进行研究，并采用HPLC对其进行指认，以期为柴胡的进一步研究提供线索。
1材料
柴胡药材，购于洛阳关林药材市场，经河南科技大学医学院路西明教授鉴定为北柴胡Bupleurum chinense 的干燥根。
Waters 600-2487高效液相色谱仪；RE-52AA旋转蒸发仪(郑州长城科工贸)；KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；METTLER-AE240型电子分析天平；核磁共振仪用Mercury-400型；日本JMS D-300型质谱仪；紫外分光光度计为HITACHI UV-2000型；薄层色谱硅胶板及柱色谱硅胶均购自青岛海洋化工厂；柱色谱用反相硅胶为DAISO公司产品；凝胶Sephadex LH-20为Pharmacia公司产品；AB-8大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂产品)；柴胡皂苷1，h，b2，b1(自制，经HPLC检测纯度>98.5%)；显色剂：1%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液；其他试剂均为分析纯。
2提取与分离
取柴胡3 kg，用10倍量的水煎煮2次，每次1 h，趁热过滤，合并滤液，于处理好的AB-8大孔吸附树脂上样，进行动态吸附，待吸附完毕后，先碱水洗脱3个柱体积，再水洗脱至中性，最后用80%乙醇洗脱至流出液对二甲氨基苯甲醛-磷酸显色反应呈阴性为止，收集醇洗脱液，浓缩并减压干燥，得浸膏粉50 g。将该浸膏用硅胶柱色谱(80～100目)进行分离，三氯甲烷-甲醇-水4∶1∶0.1～1∶1∶0.1梯度洗脱，每份300 mL。Fr.12～Fr.18经硅胶柱(三氯甲烷-甲醇-水4∶1∶0.1系统)、凝胶柱(甲醇)反复柱色谱，得化合物5(24 mg)；Fr.19～Fr.24经硅胶柱(三氯甲烷-甲醇-水7∶3∶0.3系统)、反相柱(20%甲醇系统)反复柱色谱，得化合物3(6 mg)，4(8 mg)，5(16 mg)，6(10 mg)。Fr.31～Fr.40经硅胶柱(三氯甲烷-甲醇-水7∶3∶0.3～1∶1∶0.1)、反相柱(20%甲醇系统)反复柱色谱，得化合物8 ( 70 mg)。Fr.46～Fr.79经硅胶柱色谱(三氯甲烷-甲醇-水3∶2∶0.2系统)、反相柱(30%甲醇系统)反复柱色谱，得化合物10(8 mg)，9(6 mg)，2(6 mg)，1(10 mg)，7(6 mg)，11(8 mg)。
3结构鉴定
化合物1白色粉末，Molish反应呈阳性。FAB-MS m/z 942[M]+。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：0.88，0.91，0.93，0.93，1.06，1.37(各3H，s，-CH3×6)，5.92(1H，d，J=10.4 Hz，H-12)，5.61(1H，d，J= 10.4 Hz，H-11)，4.97(1H，d，J=7.8 Hz，glc-H-1)，4.90(1H，d，J= 7.8 Hz，glc-H-1)，4.70(1H，br s，rha-H-1)，1.66(3H，d，J= 6.2 Hz，rha-CH3)；13C-NMR(C5D5N，100 MHz)数据见表1。与文献[3]报道一致，故鉴定化合物1为大叶柴胡皂苷Ⅱ。
化合物2白色粉末，Molish反应呈阳性。FAB-MS m/z 926[M]+。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：0.81，0.84，0.88，0.96，0.96，1.12，1.30(各3H，s，-CH3×7)，6.50(1H，d，J= 10.4 Hz，H-12)，5.61(1H，d，J= 10.4 Hz，H-11)，4.97(1H，d，J= 7.8 Hz，glc-H-1)，4.77(1H，d，J= 7.8Hz，glc-H-1)，4.70(1H，br s，rha-H-1)，1.66(3H，d，J = 6.4 Hz，rha-CH3)；13C-NMR(C5D5N，100 MHz)数据见表1。与文献[3]报道一致，故鉴定化合物2 为柴胡皂苷 h。
化合物3白色粉末，Molish反应呈阳性。FAB-MS m/z 797[M-H]-。1H-NMR(C5D5N，400 MHz)δ：0.85，0.95，0.99，1.16，1.22，1.43(各3H，s，-CH3×6)，5.58(1H，d，J= 7.8 Hz，H-12)，5.33(1H，d，J= 7.8 Hz，glc-H-1)，4.97(1H，d，J= 8.0 Hz，fuc-H-1)，1.42(3H，d，J= 6.6 Hz，fuc-CH3)；13C-NMR(C5D5N，100 MHz)数据见表1。与文献[3]报道一致，故鉴定化合物3为羟基柴胡皂苷 a。(李军,姜华,张延萍,张倩,徐幽)