中药材DNA条形码分子鉴定指导原则(3)
1.4.3 方法适用性考察 采用DNA条形码分子鉴定法对20批次以上药材或基原物种进行测定,积累数据,确定种内序列变异大小,保证该测定方法的适用性。1.4.4 基原物种对比验证 以分类学家确认的基原物种叶片为对象,采用该方法获得DNA条形码数据,与相应药材产生的DNA条形码数据进行对比,避免内生真菌等污染,保证结果准确性。
1.5 注意事项
实验场所应具备分子生物学实验室的基本条件。
为防止外源真菌污染,实验前须将实验用具进行高压灭菌,并用75%乙醇擦洗药材表面。有些药材本身含有内生真菌,如果内生真菌存在于药材的外围组织,则选用内部组织进行实验。如果真菌遍布整个药材,植物类药材需选用psbA-trnH条形码(真菌内不含有该基因片段),不能选用ITS2序列。为进一步确保实验结果不被真菌污染,研究者可参考GenBank数据库辨别是否为真菌序列。
中药材DNA条形码分子鉴定法不用于确定药用部位,暂不用于混合物及炮制品的鉴定。DNA条形码分子鉴定是利用通用DNA序列来进行物种鉴定,因此该方法可鉴定药材的基原物种,而不能确定药用部位。
种内阈值的确定。同一物种的不同样品间存在一定的变异范围 ......
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