濒危药用植物桃儿七野生居群遗传多样性与遗传结构的SCoT分析(2)
1.4 SCoT分析 SCoT引物采用Collard和Mackill[1]开发的引物，由上海生工生物工程有限公司合成，共计36条。随机抽取2 个DNA模板进行引物筛选，最终确定27 条扩增产物条带清晰、易于区分，且重复性高、稳定性好、具有差异的引物用于样品的多态性检测。具体引物、序列见表2。SCoT-PCR反应体系：总体积25 μL，内含1×PCR buffer，1.5 mmol·L-1 Mg2+，200 μmol·L-1 dNTP，0.4 μmol·L-1引物，40 ng模板，1 U Taq DNA聚合酶。扩增程序为94 ℃预变性4 min，然后进行36 个循环：94 ℃变性1 min， 50 ℃退火1 min，72 ℃延伸2 min，循环结束后72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。
各取PCR扩增产物5 μL，加1 μL 6×DNA Lodding Buffer(内含染料)混匀后 ......
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