药用真菌竹黄的化学成分研究(1)
[摘要]利用各种现代色谱方法从药用真菌竹黄菌Shiaria Bambusicola子座提取物的乙酸乙酯萃取部位中分离纯化14个化合物，通过波谱技术和理化性质鉴定它们的结构为竹红菌甲素( 1)，竹红菌乙素( 2)，竹红菌丙素( 3)，hypomycin A( 4)，麦角甾醇( 5)，麦角甾醇过氧化物( 6)，(22E， 24R)，5α， 8α，过氧化麦角甾，6， 9(11)， 22，三烯，3β，醇( 7)，麦角甾，7， 24(28)，二烯，3β，醇( 8)，(22E， 24R)，麦角甾，7， 22，二烯，3β， 5α， 6β，三醇( 9)，(22E， 24R)，麦角甾，7， 22，二烯，3β，5α，6β，三醇，3，O，棕榈酸酯( 10)，(22E，24R)，麦角甾，7，22，二烯，3β， 5α，6β，三醇，6，O，棕榈酸酯( 11)，棕榈酸，α，单甘油酯( 12)，棕榈酸，α， α′，甘油二酯( 13)，甘露醇( 14)。其中化合物 7～13为首次从该属真菌中分离得到。
[关键词]竹黄；化学成分；结构鉴定
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竹黄Shiraia bambusicola，又称竹花、竹参等，来源于子囊菌纲肉座菌科真菌竹黄S. bambusicola的子座[1]，主要分布于江苏、浙江、安徽、江西、四川、云贵等我国南方各省，国外仅日本和斯里兰卡有报道[2]。竹黄性味淡温，具有活血化瘀、通经活络、镇静、化痰止咳的作用，民间用来治疗风湿性关节炎、虚寒胃痛、坐骨神经痛、跌打损伤、气管炎、小儿惊风等[1]。现代研究表明竹黄具有抗菌、镇痛、抗病毒、抗肿瘤等作用。尤其近年来，竹黄中特征性光敏活性成分竹红菌素的发现使得竹黄的研究日益受到重视。据报道，竹红菌素是目前已知在可见光区的优良光敏剂，具抗病毒、杀伤肿瘤细胞、抑制微血管病变和视网膜黄斑变性、抗艾滋病毒等作用[3，7]。临床用于烧伤、风湿性关节炎、外阴白色病变和软化癜痕疙瘩等多种皮肤病的治疗[8，9]。此外，竹红菌素作为一种天然脂溶性色素，安全无毒、色泽鲜红、着色力强且有保健功能，对真菌和细菌有抑制作用，作为一种脂溶性食用色素和防腐剂具有良好的应用前景。目前，国内外学者主要针对竹黄中特征性苝醌类化合物(竹红菌素)进行系统研究，对竹黄中其他类成分的报道并不多见。为深入发掘竹黄中化学成分内涵，该文对竹黄开展化学成分研究。从乙酸乙酯部位分离并鉴定14个化合物， 其中化合物 7～13为首次从该属真菌中分离得到。
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1 材料
熔点用X，4型熔点测定仪测定(温度未校正)；核磁用Bruker Avance，300和Bruker Avance，500型核磁共振仪测定；ESI，MS用Agilent 1100 Series LC/MSD Trap型液质联用仪测定；薄层色谱硅胶为烟台化工研究所产品；柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂产品；Sephadex LH，20为Pharmacia公司产品；ODS(C，18)为Merck公司产品；其他试剂均为分析纯。
竹黄药材采购自安徽亳州，产地云南，经中国药科大学生药学研究室张勉教授鉴定为竹黄S. bambusicola，标本(20100520)保存于中国药科大学中药学院天然药化教研室。
2 提取与分离
干燥的竹黄饮片15 kg，90%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，提取液减压浓缩至无醇味。将提取液用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部位(800 g)和水部位(2 000 g)。取乙酸乙酯部位浸膏800 g经硅胶柱色谱，以石油醚，丙酮(100：0，100：5，100：13，100：25，100：50)梯度洗脱，以硅胶薄层色谱指导合并相同组分，得馏分Fr.1～Fr.15。Fr.7经硅胶柱色谱，以石油醚，乙酸乙酯(10：3)等度洗脱，反相C18柱色谱以甲醇，水(70：30)洗脱纯化，结合重结晶得化合物 5(30 mg)， 6(50 mg)， 7(30 mg)， 8(80 mg)， 10(20 mg)， 13(25 mg)；Fr.9经硅胶柱色谱，以氯仿，丙酮(100：3，100：5，100：10)梯度洗脱，反相C18柱色谱以甲醇，水(75：25)洗脱纯化，结合重结晶得化合物 11(50 mg)， 12(90 mg)；Fr.10经硅胶柱色谱，以氯仿，甲醇(200：1，100：1)梯度洗脱，结合乙醚重结晶得化合物 1(65 mg)， 4(40 mg)；Fr.13经硅胶柱色谱，以氯仿，甲醇(100：1)等度洗脱，Sephadex LH，20柱色谱以氯仿，甲醇(50：50)洗脱纯化，结合重结晶得化合物 2(30 mg)， 3(50 mg)， 9(80 mg)；Fr.15经硅胶柱色谱，以氯仿，甲醇(100：1，100：3，100：5，100：7，100：10)梯度洗脱，结合甲醇重结晶得化合物 14(1.3 g)。
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3 结构鉴定
化合物 1 黑褐色块状结晶(丙酮)，具光泽，mp 245～250 ℃， 易溶于氯仿，能溶于石油醚、丙酮、乙酸乙酯，微溶于甲醇，不溶于水。FeCl3反应呈阳性。1H，NMR(CDCl3， 300 MHz) δ：15.91(2H， 4，9，OH )，6.56(1H， s， H，5或8)， 6.53(1H， s， H，8或5)， 4.11(6H， s， 2，11，OMe)， 4.07(6H， s，6，7，OMe)，3.45(1H， s， H，15)， 3.51(1H， d， J=12.0 Hz， H，13α)， 2.63(1H， d， J=11.9 Hz， H，13β)， 1.89(3H， s， 18，Me)， 1.70(3H， s， 16，Me)；13C，NMR(CDCl3， 75 MHz) δ：207.33(C，17)， 180.28(C，4或9)， 179.81(C，9或4)， 171.78(C，3或10)， 170.91(C，10或3)， 167.43(C，6或7)， 167.32(C，7或6)， 150.86(C，2或11)， 150.62(C，11或2)， 133.94(C，1或12)， 133.16(C，12或1)， 128.51(C， 1a或12a)， 127.61(C，12a或1a)， 124.95(C，3b或7b)， 124.80(C，7b或3b)， 118.19(C，6a或7a)， 117.68(C，7a或6a)， 106.86(C，3a或9a)， 106.70(C，9a或3a)， 102.21(C，5或8)， 102.07(C，8或5)， 78.72(C，14)， 61.66(C，15)， 62.05(2或11，OMe)， 60.76(11或2，OMe)， 56.55(6或7，OMe)， 56.45(7或6，OMe)， 41.85(C，13)， 30.08(C，18)， 26.94(C，16)。以上数据与文献[10，11]报道的数据一致，故化合物 1鉴定为竹红菌甲素。, 百拇医药(殷志琦 陈占利 张健 叶文才 赵守训)
[关键词]竹黄；化学成分；结构鉴定
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竹黄Shiraia bambusicola，又称竹花、竹参等，来源于子囊菌纲肉座菌科真菌竹黄S. bambusicola的子座[1]，主要分布于江苏、浙江、安徽、江西、四川、云贵等我国南方各省，国外仅日本和斯里兰卡有报道[2]。竹黄性味淡温，具有活血化瘀、通经活络、镇静、化痰止咳的作用，民间用来治疗风湿性关节炎、虚寒胃痛、坐骨神经痛、跌打损伤、气管炎、小儿惊风等[1]。现代研究表明竹黄具有抗菌、镇痛、抗病毒、抗肿瘤等作用。尤其近年来，竹黄中特征性光敏活性成分竹红菌素的发现使得竹黄的研究日益受到重视。据报道，竹红菌素是目前已知在可见光区的优良光敏剂，具抗病毒、杀伤肿瘤细胞、抑制微血管病变和视网膜黄斑变性、抗艾滋病毒等作用[3，7]。临床用于烧伤、风湿性关节炎、外阴白色病变和软化癜痕疙瘩等多种皮肤病的治疗[8，9]。此外，竹红菌素作为一种天然脂溶性色素，安全无毒、色泽鲜红、着色力强且有保健功能，对真菌和细菌有抑制作用，作为一种脂溶性食用色素和防腐剂具有良好的应用前景。目前，国内外学者主要针对竹黄中特征性苝醌类化合物(竹红菌素)进行系统研究，对竹黄中其他类成分的报道并不多见。为深入发掘竹黄中化学成分内涵，该文对竹黄开展化学成分研究。从乙酸乙酯部位分离并鉴定14个化合物， 其中化合物 7～13为首次从该属真菌中分离得到。
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1 材料
熔点用X，4型熔点测定仪测定(温度未校正)；核磁用Bruker Avance，300和Bruker Avance，500型核磁共振仪测定；ESI，MS用Agilent 1100 Series LC/MSD Trap型液质联用仪测定；薄层色谱硅胶为烟台化工研究所产品；柱色谱硅胶为青岛海洋化工厂产品；Sephadex LH，20为Pharmacia公司产品；ODS(C，18)为Merck公司产品；其他试剂均为分析纯。
竹黄药材采购自安徽亳州，产地云南，经中国药科大学生药学研究室张勉教授鉴定为竹黄S. bambusicola，标本(20100520)保存于中国药科大学中药学院天然药化教研室。
2 提取与分离
干燥的竹黄饮片15 kg，90%乙醇加热回流提取3次，每次2 h，提取液减压浓缩至无醇味。将提取液用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部位(800 g)和水部位(2 000 g)。取乙酸乙酯部位浸膏800 g经硅胶柱色谱，以石油醚，丙酮(100：0，100：5，100：13，100：25，100：50)梯度洗脱，以硅胶薄层色谱指导合并相同组分，得馏分Fr.1～Fr.15。Fr.7经硅胶柱色谱，以石油醚，乙酸乙酯(10：3)等度洗脱，反相C18柱色谱以甲醇，水(70：30)洗脱纯化，结合重结晶得化合物 5(30 mg)， 6(50 mg)， 7(30 mg)， 8(80 mg)， 10(20 mg)， 13(25 mg)；Fr.9经硅胶柱色谱，以氯仿，丙酮(100：3，100：5，100：10)梯度洗脱，反相C18柱色谱以甲醇，水(75：25)洗脱纯化，结合重结晶得化合物 11(50 mg)， 12(90 mg)；Fr.10经硅胶柱色谱，以氯仿，甲醇(200：1，100：1)梯度洗脱，结合乙醚重结晶得化合物 1(65 mg)， 4(40 mg)；Fr.13经硅胶柱色谱，以氯仿，甲醇(100：1)等度洗脱，Sephadex LH，20柱色谱以氯仿，甲醇(50：50)洗脱纯化，结合重结晶得化合物 2(30 mg)， 3(50 mg)， 9(80 mg)；Fr.15经硅胶柱色谱，以氯仿，甲醇(100：1，100：3，100：5，100：7，100：10)梯度洗脱，结合甲醇重结晶得化合物 14(1.3 g)。
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3 结构鉴定
化合物 1 黑褐色块状结晶(丙酮)，具光泽，mp 245～250 ℃， 易溶于氯仿，能溶于石油醚、丙酮、乙酸乙酯，微溶于甲醇，不溶于水。FeCl3反应呈阳性。1H，NMR(CDCl3， 300 MHz) δ：15.91(2H， 4，9，OH )，6.56(1H， s， H，5或8)， 6.53(1H， s， H，8或5)， 4.11(6H， s， 2，11，OMe)， 4.07(6H， s，6，7，OMe)，3.45(1H， s， H，15)， 3.51(1H， d， J=12.0 Hz， H，13α)， 2.63(1H， d， J=11.9 Hz， H，13β)， 1.89(3H， s， 18，Me)， 1.70(3H， s， 16，Me)；13C，NMR(CDCl3， 75 MHz) δ：207.33(C，17)， 180.28(C，4或9)， 179.81(C，9或4)， 171.78(C，3或10)， 170.91(C，10或3)， 167.43(C，6或7)， 167.32(C，7或6)， 150.86(C，2或11)， 150.62(C，11或2)， 133.94(C，1或12)， 133.16(C，12或1)， 128.51(C， 1a或12a)， 127.61(C，12a或1a)， 124.95(C，3b或7b)， 124.80(C，7b或3b)， 118.19(C，6a或7a)， 117.68(C，7a或6a)， 106.86(C，3a或9a)， 106.70(C，9a或3a)， 102.21(C，5或8)， 102.07(C，8或5)， 78.72(C，14)， 61.66(C，15)， 62.05(2或11，OMe)， 60.76(11或2，OMe)， 56.55(6或7，OMe)， 56.45(7或6，OMe)， 41.85(C，13)， 30.08(C，18)， 26.94(C，16)。以上数据与文献[10，11]报道的数据一致，故化合物 1鉴定为竹红菌甲素。, 百拇医药(殷志琦 陈占利 张健 叶文才 赵守训)