一种基于荧光探针和HK,2细胞的中药肾毒性物质筛查方法及其应用(2)
2.2 中药化学组分的制备 把32种中药粉碎成粉,用95%乙醇加热回流提取,滤液编号为1,0;然后用石油醚,二氯甲烷,乙酸乙酯,正丁醇萃取,萃取液编号分别为1,1,1,2,1,3,1,4,残液编号为1,5。醇提后药渣用纯净水加热回流提取,滤液编号为2,0;然后用AB,8大孔吸附树脂纯化,依次用水,30%乙醇,60%乙醇,95%乙醇洗脱,各洗脱液分别编号为2,1,2,2,2,3及2,4。每种中药共分为11个组分。2.3 中药肾细胞毒性组分的筛查 取对数生长期的HK,2细胞,以3 000个/孔的密度接种于96孔板中间60孔,隔天换液,PBS漂洗1次,加入含待筛查的组分(终浓度为50 mg·L-1)的培养液100 μL/孔,待筛查组分与细胞共孵育48 h后,弃去原培养液,PBS漂洗,加入含FDA的DMEM基础培养基孵育15 min,按2.1.1项操作获取每孔的荧光信息 ......
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