枸杞色素抑制脂多糖致大鼠葡萄膜炎作用与机制的研究(2)
2.4 Western blot检测视网膜组织中iNOS的表达 每100 mg经液氮研磨的视网膜组织加入0.5 mL冷裂解缓冲液,冰浴下超声充分破碎细胞。4 ℃下1万 r·min-1离心10 min,取少量上清蛋白定量,剩余上清统一稀释后,加入上样缓冲液100 ℃水浴10 min,-20 ℃冰箱保存。以各样本总蛋白75 μg上样,6.5%SDS-PAGE凝胶电泳(80 V/120 V电压),200 mA恒定电流转膜至硝酸纤维素膜,封闭1 h,分别加入iNOS一抗(1∶200),β-actin一抗(1∶1 000)4 ℃过夜。洗膜,加入山羊抗兔二抗(1∶4 000)常温孵育2 h,洗膜,超级ECL发光试剂盒发光曝光胶片。胶片扫描结果采用Quantity-one软件分析,将目的条带吸光度与对应内参β-actin吸光度相比以校正误差,所得比值代表该目的蛋白相对含量。2.5 血清中抗氧化酶活力及MDA含量的测定 取冻存血清 ......
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