1.8 TRAP-银染法检测端粒酶活性 收集1×10⁶细胞加入预冷的Lysis buffer， PMSF，β-巯基乙醇，悬浮沉淀，涡旋振荡10 s，离心取上清液，采用考马斯亮蓝法检测上清液蛋白浓度。PCR反应体系：5 μL 10 × TRAP buffer，1 μL dNTPs，1 μL Taq-DNA polymerase，1 μL TS primer，2 μL 端粒酶提取物，39 μL DEPC水，23 ℃ 保温30 min；加1 μL CX primer 混匀。PCR扩增条件：94 ℃ 5 min，94 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 90 s，共循环35 次；72 ℃延伸10 min。每个PCR 管中加入SYBR Green 染料混匀，室温放置10 min，用荧光分光度计检测荧光强度。

    1.9 统计学分析 实验数据均以±s表示，采用SPSS 18.0统计软件行单因素方差分析，组间两两比较采用LSD或Tamhane检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 HSC分离与纯化 免疫磁珠分选法检测分选前骨髓单个核细胞中Sca-1+ 细胞百分比为(11.45±1.87)% ......