雷公藤内酯醇调控COX2/PGE2轴抑制Th17细胞分化的研究(2)
1.6 ELISA法检测培养上清液PGE2的水平 取冻存的细胞培养上清,按ELISA试剂盒说明书进行操作,最后在全自动酶标仪上读取吸光度A,根据标准曲线求得样品中PGE2的浓度。1.7 RASFs与健康志愿者 CD4+T细胞共培养 RASFs(2×104/孔) 铺24孔板过夜,TPT干预或未干预24 h后,与异基因的健康志愿者的CD4+T淋巴细胞(2×105/孔)进行共培养,细胞同时用可溶性的抗CD3抗体(1 mg· L-1)和抗-CD28抗体(500 μg·L-1)刺激,部分实验中加入外源性的PGE2。1640完全培养基培养3 d后,收集细胞进行胞内细胞因子染色实验。
1.8 细胞内IL-17和IFN-γ染色 RASFs与正常人CD4+T细胞共培养3 d,加入PMA(50 μg·L-1)、离子霉素(1 mg· L-1),莫能霉素(1 μmol·L-1)继续培养4~5 h。用PBS洗涤细胞2次,加入PE-Cy7标记的抗CD4抗体,于4 ℃避光孵育30 min,经固定破膜后加入PE标记的抗IL-17抗体 ......
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