水翁花黄酮DMC诱导肝癌细胞SMMC—7721凋亡的机制研究(2)
2.3 RT-PCR检测相关基因表达 采用不同浓度的DMC(5，10，20 μmol·L-1)处理SMMC-7721细胞48 h后，细胞消化离心，收集各组细胞，用Trizol法提取细胞总RNA。用1%琼脂糖凝胶电泳鉴定，测样品A260/A280后，做RT-PCR。按照两步法试剂盒的操作步骤分别进行逆转录反应和多聚酶链反应。cDNA 的合成参照逆转录扩增试剂盒操作程序进行。c-myc扩增条件为： 94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，58 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，33个循环；72 ℃ 5 min。hTERT扩增条件为：94 ℃ 5 min；94 ℃ 30 s，54 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35个循环；72 ℃ 5 min。β-actin扩增条件为：94 ℃ 5 min；94 ℃ 1 min，60 ℃ 1 min，72 ℃ 1.5 min，33个循环；72 ℃ 5 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳后通过凝胶成像系统分析结果 ......
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