桂枝茯苓胶囊对乳腺增生大鼠性激素水平和乳腺组织的影响(1)
[摘要] 目的：研究桂枝茯苓胶囊对乳腺增生大鼠的血清性激素水平及乳腺组织形态学的影响。方法：采用苯甲酸雌二醇注射液对SD雌性未孕大鼠按0.5 mg·kg-1肌肉注射制作乳腺增生模型，观察受试药桂枝茯苓胶囊2.0，1.0，0.5 g·kg-1和阳性对照药乳癖消0.5 g·kg-1灌胃给药5周后对乳腺增生模型大鼠乳头直径、高度，乳腺组织形态学的变化和性激素水平变化。结果：桂枝茯苓胶囊可改善大鼠乳头肿胀度，减轻乳腺组织的病变，降低血清雌二醇(E2)和升高孕酮(P)水平。结论：桂枝茯苓胶囊改善乳腺病理变化，调节大鼠性激素水平可能是治疗乳腺增生疾病的重要机制。
[关键词] 桂枝茯苓胶囊；乳腺增生；性激素
乳腺增生病(cyclomastopathy)是乳腺主质和间质不同程度地增生与复旧不全所致的乳腺结构在数量和形态上的异常，是乳腺外科临床最常见的乳房疾病，好发于25～45岁的中青年妇女。随着生活环境变化、生活节奏加快、社会压力增大等因素，乳腺增生发病率逐年增长。研究表明，性激素水平与乳腺增生有关[1]，笔者就桂枝茯苓胶囊对乳腺增生大鼠模型进行了研究，结果表明，桂枝茯苓胶囊能调节血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平，抑制乳腺增生，为桂枝茯苓胶囊治疗乳腺增生提供基础理论依据。
, 百拇医药
1 材料
桂枝茯苓胶囊规格0.31 g/粒，为江苏康缘药业股份有限公司生产，批号090912；乳癖消规格0.32 g/片，由辽宁好护士药业有限责任公司生产，批号091103；苯甲酸雌二醇注射液，规格2 g·L-1/支，上海通用药业股份有限公司，批号090501；雌二醇(E2)，孕酮(P)试剂盒均为北京华英生物技术研究所生产，批号091012。
游标卡尺(上海舒耀仪器设备有限公司)；Eppendorf5804R冷冻离心机；r-911全自动放免计数仪(中国科技大学实业总公司)。
SD雌性未孕大鼠，180～200 g，90只，由浙江省实验动物中心购入，合格证号SCXK(浙)2008-0033。饲养在温度(21±1)℃和湿度52%左右控制的标准动物房内。每天12 h的白天和黑夜循环(6：00熄)，自由进食水和食物。动物实验过程的所有操作，均按照中国科技部2006年颁布的《关于善待动物的指导性意见》进行。
, 百拇医药
2 方法
乳腺增生模型参照文献造模[2-4]，60只SD大鼠随机分为6组，分别为模型对照组(等量生理盐水10 mL·kg-1)、空白对照组(等量生理盐水10 mL·kg-1)、阳性对照组(乳癖消0.5 g·kg-1)、桂枝茯苓胶囊高、中、低剂量组(2.0，1.0，0.5g·kg-1)。正常组大鼠大腿外侧肌肉注射生理盐水(0.05 mL/只)，每2日1次，模型大鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg·kg-1，每2日1次至实验结束。造模2周后开始灌胃给药，每日1次，给药5周，末次给药0.5 h后取材。
2.1 乳腺增生的测定 造模前、后用游标卡尺精确测量大鼠第2对左右2个乳房直径及乳头高度，并观察其外观。
2.2 脏器系数和胸腺系数的测定 末次给药30 min后处死大鼠，分别测定体重、胸腺、脾脏和子宫卵巢质量，计算脏器系数。胸腺系数=胸腺质量(g)/体重(g)×100；子宫系数=子宫质量(g)/体重(g)×100。
, 百拇医药
2.3 激素的测定 实验前禁食12 h，末次给药后30 min，以10%水合氯醛按0.35 g·kg-1腹腔注射麻醉，腹主动脉取血5 mL，3 000 r·min-1高速冷冻离心15 min，取血清加4 mL冷石油醚，混匀后再次离心。吸弃上相，下相用氮气吹干后干燥密封，待测。
使用r-911全自动放免计数仪以及放射免疫试剂盒，按产品说明书，对血清进行雌二醇(E2)、孕酮(P)检测。
2.4 病理检测 取大鼠第2对乳房组织于10%甲醛溶液中固定，常规HE染色，光镜下观察各组大鼠乳腺组织增生程度。
2.5 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件分析，实验数据用±s表示，组间比较采用方差分析，t检验进行显著性分析。
3 结果
, http://www.100md.com
3.1 桂枝茯苓胶囊对乳头直径、乳头高度的影响 正常组大鼠隔毛看不见乳头位置，将毛分开后，可见乳头呈小颗粒状，贴在皮肤上，柔软，个别稍隆起。与正常组相比，模型组大鼠乳头直径和高度显著增大(P<0.01，表1)，乳头竖起充血。在注射雌二醇第3周达肿胀高峰，第4周肿胀度持平，在第5周开始下降。桂枝茯苓胶囊高、中剂量组乳头直径、高度与模型组比较显著减小(P<0.01，P<0.05，表1)。结果表明，桂枝茯苓胶囊对雌二醇诱导的乳腺增生有明显的抑制作用。
3.2 桂枝茯苓胶囊对体重及脏器系数的影响 与正常对照组比，模型组胸腺系数明显降低(P<0.01)、子宫系数明显增大(P<0.01，)，说明大鼠在雌激素刺激下免疫力下降，胸腺萎缩，子宫囊肿。与模型组比较，桂枝茯苓胶囊高中剂量组胸腺系数显著增大(P<0.05)、子宫系数显著降低(P<0.05)，乳癖消组胸腺系数、子宫系数与模型组比较P<0.01(表2)。结果表明，桂枝茯苓胶囊有改善子宫囊肿，提高免疫力作用。
3.3 桂枝茯苓胶囊对血清雌二醇(E2)、孕酮(P)含量的影响 血清雌激素和孕激素检测的结果表明，乳腺增生大鼠模型组雌激素水平升高、孕激素水平降低，与正常组比较P<0.01；桂枝茯苓胶囊高剂量组E2，P水平与模型组比较P<0.01，P<0.05；乳癖消组E2，P水平与模型组比较P<0.01(表3)。, 百拇医药(常秀娟 周军 张帅 陈健 陈春苗 王振中 萧伟)
[关键词] 桂枝茯苓胶囊；乳腺增生；性激素
乳腺增生病(cyclomastopathy)是乳腺主质和间质不同程度地增生与复旧不全所致的乳腺结构在数量和形态上的异常，是乳腺外科临床最常见的乳房疾病，好发于25～45岁的中青年妇女。随着生活环境变化、生活节奏加快、社会压力增大等因素，乳腺增生发病率逐年增长。研究表明，性激素水平与乳腺增生有关[1]，笔者就桂枝茯苓胶囊对乳腺增生大鼠模型进行了研究，结果表明，桂枝茯苓胶囊能调节血清雌二醇(E2)、孕酮(P)水平，抑制乳腺增生，为桂枝茯苓胶囊治疗乳腺增生提供基础理论依据。
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1 材料
桂枝茯苓胶囊规格0.31 g/粒，为江苏康缘药业股份有限公司生产，批号090912；乳癖消规格0.32 g/片，由辽宁好护士药业有限责任公司生产，批号091103；苯甲酸雌二醇注射液，规格2 g·L-1/支，上海通用药业股份有限公司，批号090501；雌二醇(E2)，孕酮(P)试剂盒均为北京华英生物技术研究所生产，批号091012。
游标卡尺(上海舒耀仪器设备有限公司)；Eppendorf5804R冷冻离心机；r-911全自动放免计数仪(中国科技大学实业总公司)。
SD雌性未孕大鼠，180～200 g，90只，由浙江省实验动物中心购入，合格证号SCXK(浙)2008-0033。饲养在温度(21±1)℃和湿度52%左右控制的标准动物房内。每天12 h的白天和黑夜循环(6：00熄)，自由进食水和食物。动物实验过程的所有操作，均按照中国科技部2006年颁布的《关于善待动物的指导性意见》进行。
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2 方法
乳腺增生模型参照文献造模[2-4]，60只SD大鼠随机分为6组，分别为模型对照组(等量生理盐水10 mL·kg-1)、空白对照组(等量生理盐水10 mL·kg-1)、阳性对照组(乳癖消0.5 g·kg-1)、桂枝茯苓胶囊高、中、低剂量组(2.0，1.0，0.5g·kg-1)。正常组大鼠大腿外侧肌肉注射生理盐水(0.05 mL/只)，每2日1次，模型大鼠肌肉注射苯甲酸雌二醇0.5 mg·kg-1，每2日1次至实验结束。造模2周后开始灌胃给药，每日1次，给药5周，末次给药0.5 h后取材。
2.1 乳腺增生的测定 造模前、后用游标卡尺精确测量大鼠第2对左右2个乳房直径及乳头高度，并观察其外观。
2.2 脏器系数和胸腺系数的测定 末次给药30 min后处死大鼠，分别测定体重、胸腺、脾脏和子宫卵巢质量，计算脏器系数。胸腺系数=胸腺质量(g)/体重(g)×100；子宫系数=子宫质量(g)/体重(g)×100。
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2.3 激素的测定 实验前禁食12 h，末次给药后30 min，以10%水合氯醛按0.35 g·kg-1腹腔注射麻醉，腹主动脉取血5 mL，3 000 r·min-1高速冷冻离心15 min，取血清加4 mL冷石油醚，混匀后再次离心。吸弃上相，下相用氮气吹干后干燥密封，待测。
使用r-911全自动放免计数仪以及放射免疫试剂盒，按产品说明书，对血清进行雌二醇(E2)、孕酮(P)检测。
2.4 病理检测 取大鼠第2对乳房组织于10%甲醛溶液中固定，常规HE染色，光镜下观察各组大鼠乳腺组织增生程度。
2.5 统计学方法 采用SPSS 18.0统计软件分析，实验数据用±s表示，组间比较采用方差分析，t检验进行显著性分析。
3 结果
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3.1 桂枝茯苓胶囊对乳头直径、乳头高度的影响 正常组大鼠隔毛看不见乳头位置，将毛分开后，可见乳头呈小颗粒状，贴在皮肤上，柔软，个别稍隆起。与正常组相比，模型组大鼠乳头直径和高度显著增大(P<0.01，表1)，乳头竖起充血。在注射雌二醇第3周达肿胀高峰，第4周肿胀度持平，在第5周开始下降。桂枝茯苓胶囊高、中剂量组乳头直径、高度与模型组比较显著减小(P<0.01，P<0.05，表1)。结果表明，桂枝茯苓胶囊对雌二醇诱导的乳腺增生有明显的抑制作用。
3.2 桂枝茯苓胶囊对体重及脏器系数的影响 与正常对照组比，模型组胸腺系数明显降低(P<0.01)、子宫系数明显增大(P<0.01，)，说明大鼠在雌激素刺激下免疫力下降，胸腺萎缩，子宫囊肿。与模型组比较，桂枝茯苓胶囊高中剂量组胸腺系数显著增大(P<0.05)、子宫系数显著降低(P<0.05)，乳癖消组胸腺系数、子宫系数与模型组比较P<0.01(表2)。结果表明，桂枝茯苓胶囊有改善子宫囊肿，提高免疫力作用。
3.3 桂枝茯苓胶囊对血清雌二醇(E2)、孕酮(P)含量的影响 血清雌激素和孕激素检测的结果表明，乳腺增生大鼠模型组雌激素水平升高、孕激素水平降低，与正常组比较P<0.01；桂枝茯苓胶囊高剂量组E2，P水平与模型组比较P<0.01，P<0.05；乳癖消组E2，P水平与模型组比较P<0.01(表3)。, 百拇医药(常秀娟 周军 张帅 陈健 陈春苗 王振中 萧伟)