石蒜碱诱导肺癌A549细胞凋亡作用研究(2)
2方法
2.1细胞培养A549细胞株培养于含10%胎牛血清和1%双抗(100U·mL-1青霉素、100mg·L-1链霉素)的DMEM培养液中，37℃，5%CO2培养箱中传代培养。每周传代2次，0.25%胰蛋白酶消化贴壁细胞，实验用细胞均为对数生长期细胞。
2.2MTT法检测LY对A549细胞增殖的影响取对数生长期A549细胞，用10%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞数为3×105～5×105个/mL，接种于96孔细胞培养板，每孔0.2mL，待细胞贴壁70%～80%时，吸弃旧培养液，分别加入含不同浓度LY(0，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0μmol·L-1)的培养液0.2mL，每组设8个重复。培养24h后，每孔加入20μLMTT(5g·L-1)，继续培养4h，吸弃旧培养液，加入DMSO150μL/孔，37℃低速振荡15min，在490nm处测定吸光度A，以A实验/A对照计算细胞相对活力。
2.3流式细胞仪检测细胞凋亡率取对数生长期A549细胞 ......
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2.1细胞培养A549细胞株培养于含10%胎牛血清和1%双抗(100U·mL-1青霉素、100mg·L-1链霉素)的DMEM培养液中，37℃，5%CO2培养箱中传代培养。每周传代2次，0.25%胰蛋白酶消化贴壁细胞，实验用细胞均为对数生长期细胞。
2.2MTT法检测LY对A549细胞增殖的影响取对数生长期A549细胞，用10%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞数为3×105～5×105个/mL，接种于96孔细胞培养板，每孔0.2mL，待细胞贴壁70%～80%时，吸弃旧培养液，分别加入含不同浓度LY(0，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0μmol·L-1)的培养液0.2mL，每组设8个重复。培养24h后，每孔加入20μLMTT(5g·L-1)，继续培养4h，吸弃旧培养液，加入DMSO150μL/孔，37℃低速振荡15min，在490nm处测定吸光度A，以A实验/A对照计算细胞相对活力。
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