丹参酮ⅡA抑制主动脉瓣成肌纤维细胞向成骨细胞样表型转化的机制(3)
2.4 Real-time PCR法检测骨相关蛋白BMP2，ALP和Wnt/β-catenin信号通路中GSK-3β，β-catenin的mRNA表达 采用Trizol一步法提取各组细胞总RNA，取A260/A280在1.8～2.0的总RNA 1 μg进行逆转录制作cDNA。根据GenBank数据库以及文献报告的猪BMP2，ALP，GSK-3β和β-catenin的mRNA和内参GAPDH mRNA序列合成的引物序列见表1。
取cDNA 1.0 μL进行反应，反应总体积为25 μL，反应体系包括混合引物1.0 μL，12.5 μL SYBR Mastermix，10.5 μL H2O。扩增条件为94 ℃预变性15 min后，95 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，70 ℃延伸35 s，循环40次。
采用仪器自带软件ABI Prism 7300 SDS Software进行数据分析，基于循环阈值(cycle threshold ......
您现在查看是摘要页，全文长 3726 字符。
取cDNA 1.0 μL进行反应，反应总体积为25 μL，反应体系包括混合引物1.0 μL，12.5 μL SYBR Mastermix，10.5 μL H2O。扩增条件为94 ℃预变性15 min后，95 ℃变性30 s，58 ℃退火30 s，70 ℃延伸35 s，循环40次。
采用仪器自带软件ABI Prism 7300 SDS Software进行数据分析，基于循环阈值(cycle threshold ......
您现在查看是摘要页，全文长 3726 字符。