白木香AsJAZ1基因原核载体的构建与表达(1)

http://www.100md.com 2016年1月15日 《中国中药杂志》2016年第2期

     [摘要]克隆国产沉香基原植物白木香Aquilaria sinensis jasmonate-zim-domain protein(AsJAZ1)基因的编码区，构建原核表达载体及诱导重组蛋白的表达，为筛选互作蛋白因子和研究基因功能奠定基础。该实验以白木香叶片中分离的总RNA为模板，通过RT-PCR方法克隆到茉莉酸信号转导抑制蛋白基因。JAZ(AsJAZ1)的编码区全长序列，克隆到原核表达载体pET-28a上，构建重组原核表达载体pET-28a-AsJAZ1，经酶切鉴定和测序验证后将其转入大肠杆菌BL21(DE3)，在37℃经0.5mmol·L^-1异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达4h后，可获得相对分子质量约为39kDa的融合重组蛋白的高效表达。该重组蛋白在大肠杆菌的上清和沉淀中均有表达，但以包涵体表达为主。

    [关键词]AsJAZ1基因；白木香；载体构建；原核表达

    沉香是我国传统中药，其味辛、苦，性微温，具行气止痛、温中止呕、纳气平喘等功效 ......