樟树4二磷酸胞苷2C甲基D赤藓醇激酶基因的克隆及表达分析(3)
24不同化学型樟树中CMK1基因表达量的分析
采用华越洋核酸提取试剂盒,按照说明书提取不同化学型樟树叶片的RNA,采用RTPCR方法获得不同化学型樟的cDNA。采用DNAMAN设计RealTime PCR引物,CMK1realtimeL:5′GAAGTCTTACCGTCTCTGAAACG3′;CMK1realtimeR:5′CACTGGTTCTCTTCCCGAGTGAG3′; actinrealtimeL:5′CCAGCCTTCACTCATTGGAATGG3′; actinrealtimeR:5′CTGTACTTCCTTTCTGGTGGTGC3′。进行RealTime PCR检测不同化学型樟中CMK1基因的表达量,所用仪器为ABI公司TF 7500型Real Time PCR System,反应体系为:cDNA 1 μL,SYBR Premix Ex Taq 5 μL,PrimerL 02 μL,PrimerR 02 μL,ROX(Ⅱ)02 μL ,ddH2O 34 μL ,PCR 反应条件为: 95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s ......
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采用华越洋核酸提取试剂盒,按照说明书提取不同化学型樟树叶片的RNA,采用RTPCR方法获得不同化学型樟的cDNA。采用DNAMAN设计RealTime PCR引物,CMK1realtimeL:5′GAAGTCTTACCGTCTCTGAAACG3′;CMK1realtimeR:5′CACTGGTTCTCTTCCCGAGTGAG3′; actinrealtimeL:5′CCAGCCTTCACTCATTGGAATGG3′; actinrealtimeR:5′CTGTACTTCCTTTCTGGTGGTGC3′。进行RealTime PCR检测不同化学型樟中CMK1基因的表达量,所用仪器为ABI公司TF 7500型Real Time PCR System,反应体系为:cDNA 1 μL,SYBR Premix Ex Taq 5 μL,PrimerL 02 μL,PrimerR 02 μL,ROX(Ⅱ)02 μL ,ddH2O 34 μL ,PCR 反应条件为: 95 ℃ 30 s,95 ℃ 5 s ......
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