A白蛋白纳米粒的制备及其体外抗肿瘤药效研究> 丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒的制备及其体外抗肿瘤药效(1)
[摘要] 采用高压均质法制备丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒，以粒径、包封率和载药量为评价指标，采用星点设计-效应面法优选处方，进而考察其体外抗肿瘤效果。结果表明，采用优选的处方制备的丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒形态为规则的圆球形，粒径分布均匀，平均粒径为(175.7±3.07) nm，包封率和载药量分别为90.8%±1.47%和5.52%±0.09%。对于人早幼粒细胞白血病NB4细胞，载丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒较游离药物有更优的抑瘤效果。白蛋白纳米粒制备工艺简便，可显著改善丹参酮ⅡA的溶解度，有助于拓展其在抗血液肿瘤方面的应用。
[关键词] 丹参酮ⅡA；白蛋白纳米粒；处方优化；抗肿瘤
[Abstract] In this study， the tanshinone ⅡA loaded albumin nanoparticles were prepared by high pressure homogenization method. The formulation was optimized by central composite design-response surface method (CCD-RSM )， with the particle size， encapsulation efficiency， and drug loading as indexes to investigate their in vitro anti-tumor effect. The results showed that the prepared nanoparticles had uniformly spherical morphology and uniform particle size distribution. The average particle size， encapsulation efficiency and drug loading of nanoparticles were about (175.7 ± 3.07) nm， 90.8%±1.47% and 5.52%±0.09%， respectively. Tanshinone ⅡA loaded albumin nanoparticles showed a more powerful antitumor effect than free tanshinone ⅡA for human promyelocytic leukemia NB4 cells. The preparation method of the drug-loaded albumin nanoparticles was simple and easy， and can significantly improve the solubility of tanshinone ⅡA， so it was helpful to extend its application in therapies against hematological malignancies.
, http://www.100md.com
[Key words] tanshinone ⅡA； albumin nanoparticles； formulation optimization； anti-tumor effect
丹参酮ⅡA是从中药丹参中提取的一种脂溶性成分，其在心脑血管疾病、抗菌消炎、抗氧化等方面具有确切药理作用[1]。研究发现，丹参酮ⅡA可抑制多种肿瘤细胞的生长，其对人早幼粒白血病细胞具有明显增殖抑制作用[2]。然而丹参酮ⅡA水溶性差(溶解度仅为2 mg·L-1)，口服生物利用度低(<3.5%)，半衰期短，渗透性差[3]，限制了其在臨床上的推广应用。白蛋白纳米粒是一种生物相容性优良的载体，其不仅能增大难溶性药物的溶解度，还可增强抗肿瘤药物的功效[4]。据此，考虑到丹参酮ⅡA与白蛋白结合率高(血浆蛋白结合率99.2%)的特点[3]，采用高压均质的方法[5]制备丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒，以期提高其溶解度，充分发挥其抗肿瘤作用。本研究以粒径、包封率和载药量的综合评分为评价指标，采用星点设计-效应面法优化丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒的处方，并对其药剂学特性与细胞药效学进行初步考察，为拓展丹参酮ⅡA在抗血液肿瘤方面的应用提供新剂型和新思路。
, 百拇医药
1 材料
丹参酮ⅡA(纯度>95%，南京狄尔格医药科技有限公司，批号D20150622A)；丹参酮ⅡA对照品(成都曼思特生物科技有限公司，批号MUST-15021504)；牛血清白蛋白(美国Amresco，纯度>98%)；RPMI 1640培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自美国Amresco公司；胆固醇(上海惠世生化试剂有限公司，批号151024)；精制蛋黄卵磷脂(德国Lipoid，批号510300-2153731/948)；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。
高效液相色谱仪 Agilent 1100(美国安捷伦科技有限公司)；ALC-110.4型电子分析天平(德国赛多利斯公司)；UV-2450紫外分光光度计(SHIMADZU 日本岛津公司)；Zetasizer Nano-ZS90粒度分析仪(英国Malvern)；拓普超纯水机(成都超纯科技有限公司)；EF-C5 高压均质机(加拿大Avestin公司)；HENC高速剪切仪(德尔特混合设备有限公司)；冷冻干燥机(美国Labconco公司)。
2 方法与结果
2.1 丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒的制备
称取200 mg牛血清白蛋白(BSA)溶于20 mL超纯水中，超声溶解，作为水相；另称取20 mg丹参酮ⅡA 、40 mg胆固醇、40 mg蛋黄卵磷脂溶于0.9 mL的氯仿中，超声溶解，作为油相。在高速剪切仪的作用下，将油相缓慢地注入水相中，高速剪切8 min，制备得到粗乳，迅速将粗乳转移至高压均质机中，均质10次，在35 ℃下，减压真空除去氯仿，最终得到白蛋白纳米粒胶体溶液[6]。, http://www.100md.com(陈晨 王慧洁 刘芙蓉 王银 毛声俊 金辉)
[关键词] 丹参酮ⅡA；白蛋白纳米粒；处方优化；抗肿瘤
[Abstract] In this study， the tanshinone ⅡA loaded albumin nanoparticles were prepared by high pressure homogenization method. The formulation was optimized by central composite design-response surface method (CCD-RSM )， with the particle size， encapsulation efficiency， and drug loading as indexes to investigate their in vitro anti-tumor effect. The results showed that the prepared nanoparticles had uniformly spherical morphology and uniform particle size distribution. The average particle size， encapsulation efficiency and drug loading of nanoparticles were about (175.7 ± 3.07) nm， 90.8%±1.47% and 5.52%±0.09%， respectively. Tanshinone ⅡA loaded albumin nanoparticles showed a more powerful antitumor effect than free tanshinone ⅡA for human promyelocytic leukemia NB4 cells. The preparation method of the drug-loaded albumin nanoparticles was simple and easy， and can significantly improve the solubility of tanshinone ⅡA， so it was helpful to extend its application in therapies against hematological malignancies.
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[Key words] tanshinone ⅡA； albumin nanoparticles； formulation optimization； anti-tumor effect
丹参酮ⅡA是从中药丹参中提取的一种脂溶性成分，其在心脑血管疾病、抗菌消炎、抗氧化等方面具有确切药理作用[1]。研究发现，丹参酮ⅡA可抑制多种肿瘤细胞的生长，其对人早幼粒白血病细胞具有明显增殖抑制作用[2]。然而丹参酮ⅡA水溶性差(溶解度仅为2 mg·L-1)，口服生物利用度低(<3.5%)，半衰期短，渗透性差[3]，限制了其在臨床上的推广应用。白蛋白纳米粒是一种生物相容性优良的载体，其不仅能增大难溶性药物的溶解度，还可增强抗肿瘤药物的功效[4]。据此，考虑到丹参酮ⅡA与白蛋白结合率高(血浆蛋白结合率99.2%)的特点[3]，采用高压均质的方法[5]制备丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒，以期提高其溶解度，充分发挥其抗肿瘤作用。本研究以粒径、包封率和载药量的综合评分为评价指标，采用星点设计-效应面法优化丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒的处方，并对其药剂学特性与细胞药效学进行初步考察，为拓展丹参酮ⅡA在抗血液肿瘤方面的应用提供新剂型和新思路。
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1 材料
丹参酮ⅡA(纯度>95%，南京狄尔格医药科技有限公司，批号D20150622A)；丹参酮ⅡA对照品(成都曼思特生物科技有限公司，批号MUST-15021504)；牛血清白蛋白(美国Amresco，纯度>98%)；RPMI 1640培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)购自美国Amresco公司；胆固醇(上海惠世生化试剂有限公司，批号151024)；精制蛋黄卵磷脂(德国Lipoid，批号510300-2153731/948)；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。
高效液相色谱仪 Agilent 1100(美国安捷伦科技有限公司)；ALC-110.4型电子分析天平(德国赛多利斯公司)；UV-2450紫外分光光度计(SHIMADZU 日本岛津公司)；Zetasizer Nano-ZS90粒度分析仪(英国Malvern)；拓普超纯水机(成都超纯科技有限公司)；EF-C5 高压均质机(加拿大Avestin公司)；HENC高速剪切仪(德尔特混合设备有限公司)；冷冻干燥机(美国Labconco公司)。
2 方法与结果
2.1 丹参酮ⅡA白蛋白纳米粒的制备
称取200 mg牛血清白蛋白(BSA)溶于20 mL超纯水中，超声溶解，作为水相；另称取20 mg丹参酮ⅡA 、40 mg胆固醇、40 mg蛋黄卵磷脂溶于0.9 mL的氯仿中，超声溶解，作为油相。在高速剪切仪的作用下，将油相缓慢地注入水相中，高速剪切8 min，制备得到粗乳，迅速将粗乳转移至高压均质机中，均质10次，在35 ℃下，减压真空除去氯仿，最终得到白蛋白纳米粒胶体溶液[6]。, http://www.100md.com(陈晨 王慧洁 刘芙蓉 王银 毛声俊 金辉)