京大戟醋制前后对斑马鱼胚胎的急性毒性研究(3)
2.2.8 加样回收率试验 精密量取CPet部位供试品6份,每份1 mL,并向其中加入大戟二烯醇对照品溶液(0.121 2 g·L-1)0.4 mL,水浴挥干溶剂后显色,于540 nm处测定其吸光度,计算平均回收率以及RSD。
2.3 斑马鱼毒性评价
2.3.1 斑马鱼胚胎繁殖及收集 需要产卵前一周提前将雌雄斑马鱼按照1∶2的比例分开喂养,产卵前一晚将其合并,捞入特制的产卵容器中,放入氧气泵以及加热棒,控制温度(28.5±0.5) ℃,第2天捞出成鱼,收集鱼卵,清洗并除去未受精的死卵以及粪便等杂物。鱼卵采用人工海水培养,于培养箱中培养24 h,挑取健康发育的受精卵用于实验。
2.3.2 DMSO对斑马鱼的急性毒性 由于斑马鱼胚胎无法口服给药,故需将样品溶解于培养胚胎的人工海水中,从而使得斑马鱼胚胎自主的从水中吸收待测药物。京大戟提取物中的萜类成分等不易溶于水,故实验中采用二甲基亚砜(DMSO)助溶,而DMSO也具有毒性,因此有必要对其毒性进行评价,从而消除DMSO对于实验的影响。
实验方法采用静水实验法,以96 h为1个试验周期。采用24孔板,每孔放入10枚健康斑马鱼胚胎,用滴管将孔中的水吸去,分别加入不同浓度(0.1%,0.2%,0.4%,0.8%,1% ......
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2.3 斑马鱼毒性评价
2.3.1 斑马鱼胚胎繁殖及收集 需要产卵前一周提前将雌雄斑马鱼按照1∶2的比例分开喂养,产卵前一晚将其合并,捞入特制的产卵容器中,放入氧气泵以及加热棒,控制温度(28.5±0.5) ℃,第2天捞出成鱼,收集鱼卵,清洗并除去未受精的死卵以及粪便等杂物。鱼卵采用人工海水培养,于培养箱中培养24 h,挑取健康发育的受精卵用于实验。
2.3.2 DMSO对斑马鱼的急性毒性 由于斑马鱼胚胎无法口服给药,故需将样品溶解于培养胚胎的人工海水中,从而使得斑马鱼胚胎自主的从水中吸收待测药物。京大戟提取物中的萜类成分等不易溶于水,故实验中采用二甲基亚砜(DMSO)助溶,而DMSO也具有毒性,因此有必要对其毒性进行评价,从而消除DMSO对于实验的影响。
实验方法采用静水实验法,以96 h为1个试验周期。采用24孔板,每孔放入10枚健康斑马鱼胚胎,用滴管将孔中的水吸去,分别加入不同浓度(0.1%,0.2%,0.4%,0.8%,1% ......
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