4′—去甲基表鬼臼毒素的酶法糖基化(3)

http://www.100md.com 2017年6月15日 《中国中药杂志》2017年第12期

     为优化AbGT5催化DMEP糖基化的反应条件，分别考察了温度、缓冲液pH及二价金属离子等因素对酶催化活性的影响。酶促反应体系为200 μL，包含1 μL 50 mmol·L^-1的DMEP(1)，2 μL 50 mmol·L^-1的UDP-Glc，20 μL 2 g·L^-1的AbGT5纯酶，Reaction Buffer补齐至200 μL，分别在4，16，20，25，30，35，40，45，50 ℃水浴下反应30 min以考察温度对酶催化活性的影响。同样在20 ℃条件下，分别测定了以pH 4.0，5.0，6.0的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液、pH 6.0，7.0，8.0的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、pH 8.0，9.0的Tris-HCl缓冲液以及pH 9.0，10.0，11.0的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液作为Reaction Buffer时，AbGT5的催化活性。随后在20 ℃及pH 9.0的Tris-HCl条件下，考察了不同二价金属阳离子(BaCl₂，CaCl₂，CoCl₂，CuCl₂，FeCl₂ ......