补骨脂抑制肝组织NF—κB活性治疗幼龄小鼠脂肪肝的机制研究(3)
2.7 Western blot方法测定肝组织NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65蛋白表达 提取肝组织总蛋白,用BCA法测定蛋白浓度,-80 ℃保存。取40 μg蛋白,变性后用10%SDS-PAGE分离胶电泳,PVDF膜转膜,5%脱脂奶粉(非磷酸化蛋白)或0.5%牛血清蛋白(磷酸化蛋白)封闭,4 ℃孵育一抗(GAPDH稀释比例为1∶1万;NF-κB p65稀释比例为1∶2 000;磷酸化NF-κB p65稀释比例为1∶1 000)摇床过夜,TBST洗膜后,孵育二抗30 min,TBST洗膜后,化学发光法检测PVDF膜,用AlphaEaseFC软件进行分析灰度值。2.8 统计学方法 运用SPSS 19.0软件进行数据处理,所有数据均符合正态分布,以±s表示,各组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),多样本均数间的两两比较根据方差齐同性检验结果,选择结果判读标准“LSD-t”或者“Games-Howell”,以P<0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 补骨脂对幼龄脂肪肝小鼠OGTT及HOMA-IR的影响 与正常组比较 ......
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