ＨＰＬＣ测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量
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【摘要】 目的 建立用高效液相色谱法测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱含量的方法。方法 采用十八烷基础烷键合硅胶为填充剂，0.01 mol/L磷酸二氢钾-甲醇(94∶6)为流动相，检测波长为210 nm。结果 盐酸麻黄碱进样量在0.3145～3.1450 μg范围内呈现良好的线性关系，平均回收率为99.38%,RSD为0.59%(n=5)。结论 本方法结果准确，重现性好，可用于麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量测定。
【关键词】 高效液相色谱法；麻杏止咳糖浆；盐酸麻黄碱；含量测定
麻杏止咳糖浆具有镇咳、祛痰、平喘的功效，可用于治疗急、慢性支气管炎及喘息等病症，由麻黄、苦杏仁、石膏、甘草等提取制成，麻黄为方中主药，盐酸麻黄碱为其主要活性成分，原标准中仅有麻黄的薄层色谱法(TLC)鉴别。有报道[1]采用薄层色谱法测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱含量的，本文采用高效液相色谱法测定麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量，方法简便、快速，结果准确，现报道如下。
1 仪器与试剂
SP8800型高效液相色谱仪(美国光谱物理公司：SP8800泵，UV1000紫外检测器)；UV-2201型紫外分光光度计(日本岛津公司)；盐酸麻黄碱对照品(中国药品生物制品检定所)；麻杏止咳糖浆(河北天合制药有限公司)。试剂中甲醇为色谱纯，氢氧化钠、乙醚、盐酸、磷酸二氢钾等均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS2C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；流动相：0.01 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至2.5)∶甲醇(94:6)；流速：1.0 ml/min；检测波长：210 nm；柱温：室温；进样量：10 μl。上述条件下盐酸麻黄碱与相邻成分实现基线分离。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加0.1%盐酸甲醇溶液制成每1 ml含0.6 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品麻杏止咳糖浆10 ml，加水20 ml,加5 mol/L氢氧化钠溶液5 ml，轻轻摇匀，用乙醚振摇提取4次，每次40 ml，合并乙醚液，加0.1%盐酸甲醇溶液2 ml，摇匀，挥干，残渣加0.1%盐酸甲醇溶液使溶解于50 ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 线性关系考察 分别精密量取2.2中对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml置10 ml量瓶中，加0.1%盐酸甲醇溶液并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液各10 μl，注入液相色谱仪测定，记录色谱图，将所测得的盐酸麻黄碱峰面积A和进样量M进行回归，得方程：A=2.493×103+3.0346×106M,r=0.9999,结果表明盐酸麻黄碱进样量在0.3145～3.1450 μg范围内呈现良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取同一份盐酸麻黄碱对照品溶液10 μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定，盐酸麻黄碱面积积分值分别为2049927,2032834,2041772,2028553,2055729,RSD为0.56%。
2.6 重复性试验 取同一批号的麻杏止咳糖浆，按2.3方法分别制备5份供试品溶液，按上述色谱条件测定盐酸麻黄碱的含量(mg/ml)为0.3495,0.3512,0.3533,0.3481,0.3467,平均含量为0.3498 mg/ml,RSD为0.74%。
2.7 稳定性试验 按供试品溶液的制备方法制备样品溶液，于制备后10 h内每间隔2 h进样1次，按上述色谱条件测定，盐酸麻黄碱峰面积积分值分别为2429668,2410312,2422009,2435163,2443506,RSD为0.52%，表明样品溶液中的盐酸麻黄碱含量在10 h内稳定。
2.8 回收率试验 采用加样回收，精密量取5份已测知含量的样品溶液(含量为0.3421 mg/ml)各5 ml，分别精密加入盐酸麻黄碱对照品1.71 mg，按供试品制备方法制备，进样测定，计算回收率，结果见表1。
表1 回收率试验结果(略)
2.9 样品测定 取麻杏止咳糖浆5批，按上述方法制备供试品溶液和对照品溶液，精密量取各溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，按外标法计算，5批样品结果分别为0.3946,0.3726,0.3550,0.3495,0.3521 mg/ml。
3 讨论
3.1 流动相的选择 多次试验表明，选用C18柱，以甲醇-水、乙腈-水为流动相进行分离，被测成分达不到良好的分离效果，经参考相关文献[2]，以0.01 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至2.5)甲醇为流动相，比例94∶6，样品达到基线分离。
3.2 最大吸收波长的选择 选用UV2201型紫外分光光度计对盐酸麻黄碱的标准溶液进行光谱扫描，由扫描图谱看出，盐酸麻黄碱的紫外最大吸收波长为208 nm，考虑到此波长处为末端吸收，干扰严重，故把最大吸收波长定在210 nm。
3.3 曾有文献[3，4]报道HPLC法测定中药中麻黄碱的含量，但分离度不好，基线没有得到很好的改善，本文选用C18色谱柱，以0.01 mol/L磷酸二氢钾(用磷酸调节pH至2.5)甲醇为流动相，使得盐酸麻黄碱和相邻峰得到较好的分离，提高了分离度，色谱峰形对称，基线平直，系统稳定。
参考文献
1 黄洪.麻杏止咳糖浆中盐酸麻黄碱的含量测定.中国药业，2001,10:3738.
2 国家中成药标准汇编内科肺系分册.北京：国家药品监督管理局，2002,509.
3 李红霞，丁明玉，吕琨，等.高效液相色谱法则测定麻黄及其制剂中的麻黄类生物碱和川芎嗪.色谱，2001,19:161163.
4 王曙东，宋炳生，李汉宝，等.RPHPLC测定小儿麻甘冲剂水煎液中麻黄碱和伪麻黄碱的含量.中华西药学杂志，2001,15:458459.
作者单位： 056003 河北省邯郸市，邯郸康业制药有限公司(景金柱)；邯郸市药品检验所(余卫兵、毕雪艳、郭迎霞)
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