冯艳敏 孙嘉琳 胡坤 张世奇 朱秀珊 张云 陈自辉

    放射治疗、化学治疗等传统治疗肿瘤的方法虽然杀伤作用强,但选择性很弱,在杀伤肿瘤细胞的同时也大量杀伤正常细胞,导致治疗效果难以令人满意。提高细胞免疫能力以达到治疗肿瘤的目的,是目前肿瘤生物治疗研究的重要方向。把超抗原(superantigen,SAg)应用于肿瘤的免疫治疗,是在抗肿瘤实验研究的基础上发展起来的一种新的肿瘤免疫治疗研究模式[1-3]。超抗原是一类能直接激活某些T细胞亚型或 B细胞亚型的结构上相似的一类蛋白质,引起众多细胞因子释放,激活 T、B、抗原呈递细胞(APC)、杀伤细胞(NK)等细胞;另一方面,也可导致免疫抑制、免疫耐受和无能应答[4]。金黄色葡萄球菌肠毒素 A(SEA)是金黄色葡萄球菌的产物,可直接与APC膜上的主要组织相容性复合体 MHCⅡ类分子的肽结合沟外侧的高度保守区结合,使表达有T细胞抗原受体TCRV区的 T细胞大量激活[5],强烈诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性及细胞因子的产生。由于 SEA诱导的CTL对肿瘤细胞有强大的杀伤作用,因此应用 SEA进行抗肿瘤治疗得到了人们的热切关注[6]。外周血单核细胞(PBMC)是不均一的细胞群体,包括CD4T细胞、CD8T细胞、NK等免疫活性细胞。CD4T和 CD8T细胞亚群发挥特异性杀肿瘤效应,而NK细胞的杀瘤活性不具特异性,这些免疫细胞在肿瘤免疫中发挥主要作用。免疫细胞表面受体和相应配体结合后,通过信号转导,活性增强,其杀瘤活性提高。超抗原为多克隆细胞激活剂,能在极低的浓度下激活免疫细胞[7]。

    1 材料与方法

    1.1 材料 大肠杆菌BL21(DE3)为本实验室保存;重组质粒pET22b-SEA由大连宝生物工程公司合成;IPTG为 Solarbio产品;His?Bind Buffer Kit蛋白纯化试剂盒购于 Novagen公司;DNA及蛋白分子质量标准为 Promega公司产品;人肺腺癌细胞A 549购自中国科学院上海细胞所;人外周血白膜购自天津市血液中心;DMEM高糖培养基和胎牛血清(FBS)均购自 Gibco公司;四甲基偶氮唑盐(MTT)为上海生工生物工程公司产品;胰蛋白酶、G 418、二甲基亚砜(DMSO)均为 Promega公司产品;

    1.2 方法 ......