阿布力克木 王卫星 徐胜 张昌威 余佳 陈辰

    重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)进展快,病程凶险,是临床上常见的严重急腹症,病死率为 15% ～35%[1]。急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是胰腺炎胰外器官损伤中最常见的表现,发生率高达 60%～70%[2],发病 1周死亡约30%存在ALI和急性呼吸窘迫综合征。ⅡA型分泌型磷脂酶A2(groupⅡA secreted phospholipase A2,sPLA2-Ⅱ A)通过直接损伤破坏质膜、间接产生炎性介质、趋化激活炎性细胞,引起肺部炎性反应,对肺泡上皮细胞毛细血管内皮和肺表面活性物质都有直接的损伤作用[3]。本实验使用的 sPLA2-ⅡA由北京大学化学院研制,将其应用于大鼠 SAP模型,探讨该新型特异性磷脂酶 A2(PLA2)抑制剂在 SAP相关性肺损伤中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验分组、模型制备以及获取标本 Wistar大鼠 24只,体重 200～250 g(湖北省疾病预防控制中心提供),随机分为 3组,每组 8只：假手术组(SO组),SAP模型组(SAP组),抑制剂预处理组(抑制剂组,5mg/kg)。实验前禁食 12 h,禁水 4 h。以 10%水合氯醛腹腔注射(3ml/kg)麻醉,无菌操作下行上腹正中切口进腹,采用 4.5号头皮针头穿过十二指肠对系膜缘经乳头逆行插入主胰管,5%牛磺胆酸钠(STC)溶液(1m l/kg)沿胰胆管逆行恒速(0.1ml/m in)注射造模。确认沿胰管周围组织出现水肿、充血,出血等改变,表明造模成功,后关腹。术后皮下补液(2ml/100 g)。

    SAP组：术前 30m in股静脉注射等体积不含 sPLA2-ⅡA抑制剂的溶剂(10%DMSO),然后制备胰腺炎模型。SO组：术前30min股静脉注射等体积不含 sPLA2-ⅡA抑制剂的溶剂,胆胰管逆行注射等体积的 0.9%氯化钠溶液。抑制剂组：术前30min股静脉分别注射 10%DMSO溶解的 sPLA2-ⅡA抑制剂(5mg/kg),制备 SAP模型,同 SAP组。

    1.2 材料与试剂 STC购自Sigma公司,使用前无菌 0.9%氯化钠溶液配置。新型 sPLA2-ⅡA(pku-mdl-101)由北京大学化学与分子工程学院提供,用 10%DMSO新鲜配置,sPLA2活性测定均采用 sPLA2活性分析试剂盒检测(cayman公司,美国) ......