焦娟 赵满仓 魏文青 刘晶 张艳 付瑶

    ·论著·

    人载脂蛋白A5单抗制备及临床应用的研究

    焦娟 赵满仓 魏文青 刘晶 张艳 付瑶

    目的制备抗人载脂蛋白A5(ApoA5)单克隆抗体(McAb)，建立ELISA双抗体夹心法，并进行初步的临床应用。方法利用合成的人ApoA5抗原免疫BALB/c小鼠，制备McAb，并对抗体的效价、特异性、亚类及位点进行了测定，建立了ELISA双抗体夹心法，测定了正常对照组(145例)和冠心病组(68例)血清中ApoA5的含量。结果获得了5个稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株，且均为IgG2a型。腹水效价达到1.6×105。冠心病组胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和ApoB水平明显高于对照组(P1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2007年9月至2008年11月门诊体正常人145例作为正常对照组，男87例，女58例;年龄38～78岁，平均年龄60岁。选择同期我院心内科确诊的冠心病的患者68例(参考1979年WHO诊断标准)作为冠心病组，男42例，女26例;年龄41～83岁，平均年龄(61±8)岁。2组性别比、年龄间有均衡性。

    1.2 试验材料 BALB/c小鼠，购自中国医学科学院基础医学研究所实验动物中心;SP2/0细胞株，由军事医学科学院动物所惠赠;弗氏佐剂，本实验室自制;ApoA5抗原，由北京博奥森生物技术有限公司合成;羊抗鼠-HRP购自博奥森生物技术有限公司;辣根过氧化物酶(HRP)，Sigma产品。ApoA1、ApoB抗原由卫生部北京老年医学研究所惠赠。TG、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、ApoA1、ApoB试1盒、全自动生化分析仪均为罗氏公司产品。

    1.3 方法

    1.3.1 动物免疫:用常规免疫法免疫BALB/c小鼠，第1次用完全佐剂，第2、3次用不完全佐剂，第4次由脾脏直接注射。

    1.3.2 抗ApoA5单克隆抗体(McAb)的制备:①细胞融合:取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞在50%聚乙二醇(PEG)的作用下8∶1比例进行融合 ......