姜小华 张柳 王晓希

    临床发现,骨折合并脑外伤的患者,相对单纯骨折患者,其骨痂的数量多、骨折愈合的速度快[1]。1987年 Perkins等[2]报道了这一现象,国内学者也通过动物实验验证了这一现象[3],但其作用机制仍未明确。近年来,细胞因子在脑外伤促进骨折愈合方面的研究日益受到重视。我们通过免疫组织化学染色和原位杂交技术,研究大鼠骨折合并脑外伤时血小板衍生生长因子(platelet-derived grow th factor,PDGF)含量的变化与骨折位点的表达,探讨 PDGF在脑外伤时骨折愈合过程中可能的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物及分组 12周雄性 SD大鼠 32只,体重(356±25)g,购于北京大学医学部实验动物科学部。实验过程中于室温 20℃自然光照的动物房中分笼饲养,供给大鼠标准饲料,自用饮用水。定期紫外线消毒与排风。喂养 1周适应环境后随机分为 4组,每组 8只：A组为骨折合并脑外伤 1周组,A 1组为单纯骨折 1周组,B组为骨折合并脑外伤 2周组,B1组为单纯骨折 2周组。

    1.2 主要试剂 PDGF多克隆抗体、HRP SPKit、PDGF-B多点标记的 DIG探针原位杂交试剂盒由天津灏洋生物制品科技有限责任公司提供。

    1.3 模型制作 大鼠经 100ml/L水合氯醛(3ml/kg)腹腔内注射麻醉后,制作脑损伤模型[4]：常规去毛、备皮、碘伏消毒,显露右颅顶骨,中线旁 2mm处开直径 5mm骨窗,将 20 g砝码于 30 cm高处通过导向杆坠落,撞击置于硬膜上的圆锥致中度脑损伤。股骨干骨折模型的制作[5]：右下肢股外侧切口,沿股外侧肌间隙钝性分离至股骨干,在股骨干中 1/3用线锯断成横行骨折,然后以直径 1.5mm克氏针逆行从大粗隆穿出,复位后将克氏针顺行穿入股骨远端髓腔,确认牢固后,0.9%氯化钠溶液冲洗伤口,分层关闭切口,碘伏再消毒。肌内注射青霉素至术后 5 d(5万 U/d)预防感染。术毕分笼饲养。

    1.4 标本采集与处理 分别将受试大鼠经水合氯醛腹腔内注射麻醉后,于术后第 1、2周心脏取血处死,每组 8只,取大鼠右侧完整的股骨标本,0.9%氯化钠溶液冲洗,摄CR片 ......