杨芳 李秀娟 徐保红

    副溶血弧菌(vibrio parahaemolyticus,VP)是一种革兰阴性嗜盐杆菌,是引起食源性疾病的重要病原之一。该菌主要分布于沿岸海水、海河交界处及海产品中,是沿海地区引起食物中毒的重要病原菌。它在海产品上的带菌率高达45.7%[1],其生长速度是一般细菌(如大肠杆菌、沙门氏菌等)的 2倍,因而更易于引起食物中毒。常规的 VP的检测方法包括增菌培养、选择性培养、生化试验和血清学反应等过程,耗时长、操作繁琐、检出率低,不适应实际检验工作的需要。随着科学技术的发展,一些快速检测方法以其特异性强、敏感性高、分辨率高、操作简单、稳定性好、耗时短的优点逐渐取代常规的检测方法,在病原菌检测方面有着广泛的应用前景。本文就VP的快速检测方法综述如下。

    1 聚合酶链式反应(PCR)技术

    由于 PCR技术具有敏感、快速、特异性强、操作简单等特点,在微生物的鉴定检测方面展现了巨大的潜力。以常规的分离培养方法检测 VP耗时长,需要 4～5 d,而采用 PCR法进行检测,只需要 10 h,不仅节省了时间,且可提高检测通量,一次可检测多达 96份样品。Kim等[2]建立了以 toxR基因为靶基因采用 PCR方法检测了 373株 VP和 290株其他菌株,结果表明373株VP都携带toxR基因而非 VP菌株结果均为阴性。Venkateswaran等[3]针对 VP的 gyrB基因进行 PCR引物设计,扩增片段大小为 285 bp,运用该 PCR方法检测来自环境、食品和临床样品中的 VP,共 117菌株,结果表明所有的菌株都能扩增出258bp的基因片段。除了 toxR、gyrB基因外,也可采用 tl、tdh、tlh、trh、Fla基因和 pR72H片段等[4-8]来检测 VP。

    1.1 多重 PCR技术 Bej等[9]针对 VP的 tlh基因、tdh基因、trh基因用多重 PCR方法检测贝类中的 VP。检测结果表明：从临床、海产品、环境和牡蛎中分离得到的 111份 VP菌株,用该方法对所有的 VP菌株全部扩增出tlh基因,60份 VP菌株扩增出 tdh基因,43份VP菌株扩增出trh基因。该方法的灵敏度较高,10 g牡蛎组织增菌肉汤的最低检测量为 10～100 cfu[10]。吴彩云等[11]通过对反应体系中各组分含量的优化及循环参数的摸索,确立了同时检测 t1和tdh基因的多重 PCR技术,结果与常规 PCR的一致。该法不仅具有常规 PCR的优点,而且还能节省时间及 Taq酶、dNTP等材料,还可尽量减少或避免因操作步骤过多因污染所带来的假阳性等问题[12] ......