姚继方 王明正 王朋

    肿瘤转移是由诸多因素决定的多步骤、序贯性的生物学过程，它涉及肿瘤细胞的运动、迁移、粘附、侵袭、生长、新血管生成、逃避免疫等几个关键步骤，但具体机制仍不清楚。非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌80%以上，很多患者就诊时已经发生了远处转移，转移是影响NSCLC患者5年生存率的重要因素，也是导致患者死亡的重要原因。近年来，趋化因子及其受体所介导的肿瘤转移“归巢”信号机制的提出，丰富和发展了Paget的“种子与土壤”学说，研究发现，趋化因子及其受体所介导的肿瘤特异性器官转移主要是通过基质细胞衍生因子(SDF-1)/趋化因子受体-4(CXCR4)通路实现的[1，2]。乙酰肝素酶(HPA)是体内唯一可以水解细胞外基质和基底膜中的硫酸乙酰肝素蛋白多糖的内切酶，研究发现HPA活性增强与多种肿瘤转移有关[3，4]。本研究采用免疫组化的方法，通过对NSCLC手术切除标本检测CXCR4、HPA的表达，并与正常肺组织进行对比，结合患者临床病理资料，探讨CXCR4、HPA在NSCLC中发生发展的关系，为判断NSCLC的生物学行为提供参考指标。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2009年3至12月在河北医科大学第四医院胸外科行手术切除的NSCLC组织标本52例，同时取20例正常肺组织(距离肿瘤边缘5 cm以上)标本作为对照。所有标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，4μm连续切片，HE染色后经病理学检查证实。所有病例均无术前化疗、放疗治疗史。其中男42例，女10例;年龄40～74岁，平均年龄62.40岁;鳞癌22例，腺癌17例，腺棘细胞癌10例，粘液表皮样癌2例，透明细胞癌1例;无淋巴结转移26例，淋巴结转移26例;临床分期采用国际抗癌协会(UICC)2009年公布的NSCLC TNM分类分期标准:Ⅰ与Ⅱ期29例，Ⅲ与Ⅳ期23例。

    1.2 试剂与方法 兔抗人CXCR4单克隆抗体购自Abcam(Hong Kong)公司，兔抗人HPA单克隆抗体购自SANT CRUZ生物技术公司，即用型Biotin SP-HRP免疫组化染色试剂盒购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，浓缩型DAB试剂盒购自中国中杉金桥试剂公司。采用免疫组织化学S-P法，按试剂盒说明书进行操作。

    1.3 结果判定 CXCR4、HPA阳性染色定位于细胞浆，以胞浆内出现均匀一致的棕黄色颗粒定义为阳性细胞。参照Andre等[5]评分标准 ......