徐育冬 靳洪涛 宋新梅 张绍君

    类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性进行性自身免疫性疾病，以关节滑膜炎，对称性和破坏性关节病变为主要特征[1]。血管新生促进滑膜血管翳的发生和发展，维持血管翳的侵袭性，促进软骨和骨破坏及关节重构，最终造成关节畸形、强直和功能丧失。缺氧诱导因子-1(HIF-1)、血管内皮生长因子(VEGF)是促进血管新生的关键因子，可能在RA发病机制中起重要作用。在细胞因子相互作用的网络中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)居于中心位置，是RA滑膜炎发生和持续的一个关键性因子[2]。本试验以佐剂诱导的关节炎大鼠模型为基础，观察肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(益赛普)对关节炎的影响，评价其疗效，探讨益赛普治疗RA的机制、临床应用价值及其对滑膜组织血管增生的抑制情况。

    1 材料与方法

    1.1 动物与试剂 Wistar大鼠90只，雄性，体重140～160 g，由河北省实验动物中心提供，合格证号 802120，许可证号SCXK(冀)2003-1-003。

    完全弗氏佐剂(FCA，10 ml)购于 Sigma公司，卡介苗(BCG，50 mg/支)购自华瑞创新生物科技开发中心。TNF-α免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物制品公司，VEGF免疫组化成套试剂盒购自晶美生物制品公司。

    1.2 分组及AA大鼠模型的建立 将90只雄性Wistar大鼠采用数字表法随机分为5组，分别编号Ⅰ～Ⅴ组，Ⅰ组10只，Ⅱ～Ⅴ组每组20只。Ⅰ组为正常对照组，Ⅱ组为单纯造模组，Ⅲ组为造模+甲氨喋呤组，Ⅳ组为造模 +益赛普低剂量组(0.44 mg/kg)，Ⅴ组为造模 +益赛普高剂量组(0.88 mg/kg)。将FCA与卡介苗配置为含BCG 10mg/ml的水包油乳剂。试验第1天在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组大鼠的尾根部皮内注射该乳剂0.2 ml致炎，诱发佐剂性关节炎。而Ⅰ组大鼠的尾根部皮内注射等量0.9%氯化钠溶液。

    1.3 给药 于致炎后第12～23天Ⅳ、Ⅴ组皮下注射益赛普，Ⅳ组予 以 益 赛 普 0.44 mg· kg-1· d-1，Ⅴ 组 予 以 益 赛 普0.88 mg·kg-1·d-1。给药容积均为 0.1 ml/100 g，连续12 d。Ⅲ组大鼠给予甲氨喋呤2.7 mg/kg灌胃，Ⅱ组大鼠给予蒸馏水灌胃0.5 ml·只-1·d-1;给药时间均固定在每天上午 9∶00。

    1.4 测量足体积及关节炎指数(AI)的评定 于实验的第0、3、6、9、12、15、18、21、24、27 天用排水法测右足体积 ......