朱卫东 王鑫 张一兵

    EZH2基因是新发现的一种癌基因，有促进细胞增殖作用[1]。P16蛋白为细胞周期蛋白依赖性激酶4(Cyclin-dependentinase 4，CDK4)抑制因子。它们都参与了多种恶性肿瘤的发生、发展，但EZH2与P16蛋白在甲状腺乳头状癌表达相关性的研究笔者至今尚未见国内外报道。本研究利用免疫组化技术研究人类甲状腺癌组织石蜡切片中EZH2和P16蛋白的表达及其相关性，从蛋白水平研究EZH2与P16在人类甲状腺癌发生发展及预后中的作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料 选择2005年1月至2009年12月河北省唐山市人民医院院普外科手术切除并经病理组织学确诊的乳头状癌标本50例为恶性组织，另取甲状腺瘤20例为对照。复阅上述患者的病理切片，重新切片。

    1.2 试剂 一抗分别为鼠抗人EZH2单克隆抗体、P16单克隆抗体及免疫组化SP试剂盒为即用型，均为北京中杉生物公司产品。

    1.3 免疫组化SP法检测EZH2、P16基因表达 石蜡切片经二甲苯脱蜡和乙醇梯度脱水后，PBS冲洗3遍;每张切片滴加3%H2O2，阻断内源性过氧化物酶活性，室温孵育20 min;PBS冲洗3 min×3次;将切片放入pH值7.0 EDTA修复液微波抗原修复15 min，取出切片，自然冷却至室温，PBS缓冲液冲洗2遍;滴加一抗(EZH2 1∶150，P16 1∶50)，4℃ 过夜。阴性对照以PBS代替一抗。PBS冲洗3 min×3次;滴加二抗，37℃孵育30 min，PBS冲洗3 min×3次;切片上滴加新鲜配制的DAB溶液，显色3～5 min，显微镜下，观察胞质和(或)胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞;自来水冲洗，苏木素复染，中性树胶封片。

    1.4 阳性结果判断 EZH2及P16基因的阳性表达部位均主要在细胞核 ......