张笑盈 董稚明 赵瑞力 郭艳丽 邝钢

    侵袭和转移是恶性肿瘤重要的生物学特征之一，是影响预后的重要因素。恶性肿瘤在穿越自然屏障侵袭周围组织并发生远处转移的过程中，细胞外基质(extracellular matrix，ECM)和基底膜(basement membrane，BM)重构是关键环节。在参与ECM降解的酶系中，基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)及基质金属蛋白酶抑制剂(Tissue inhabitor of mettalloproteinases，TIMPs)起到了关键作用。MMPs几乎能降解ECM的所有成分，而TIMPs可以与MMPs结合进而抑制MMPs的降解作用[1]。MMP-1属于间质胶原酶，在肿瘤的侵袭和转移中发挥着非常重要的作用[2]。TIMP-1可与多种活化的MMPs结合，使其失活或不能活化，与此同时肿瘤侵袭转移的潜能也随之相应的降低[3]。目前，国内外对状细胞喉鳞状细胞癌组织中MMP-1和TIMP-1表达的研究还比较少，本研究通过免疫组化方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析MMP-1和TIMP-1在喉鳞状细胞癌组织中的蛋白和mRNA的表达，探讨其与喉鳞状细胞癌发生发展、浸润及转移的关系。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取河北医科大学第四医院2006年3月至2008年2月头颈外科手术切除的喉鳞状细胞癌手术切除标本，一部分液氮保存用于RNA的提取;另一部分10%甲醛固定用于免疫组化研究。用于提取RNA的喉鳞状细胞癌标本49例，男47例，女2例;其中取其癌旁组织(距癌边缘1.5～2 cm)15例;用于免疫组化研究的喉鳞状细胞癌标本51例，男49例，女2例;其中取其癌旁组织(距癌边缘1.5～2 cm)22例。

    1.2 试剂 RT-PCR试剂盒购自Promega公司;Trizol试剂购自北京赛百盛基因技术有限公司;PCR扩增体系采用购自Promega公司的Go Taq Green Master Mix;MMP-1和TIMP-1抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 免疫组化法检测 MMP-1和 TIMP-1在喉磷癌中的表达:全部标本均经10%中性甲醛固定，常规石蜡包埋，4μm连续切片，常规脱蜡水化后，3%甲醇过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，高压抗原分别修复2 min(MMP-1)和3 min(TIMP-1) ......