王建英 马俊英 吴淑娟 程建新 李勇

    人类非经典白细胞抗原HLA-G在绒毛滋养细胞表面大量表达，是妊娠成功的必要条件，其在母胎免疫耐受方面的作用已经得到公认，目前也是肿瘤免疫逃逸基础研究的热点之一。已有研究报道了黄体酮、绒毛膜促性腺激素、孕激素等可通过上调HLA-G的水平以达到保胎的目的，由此推测临床的引产药物如天花粉蛋白、米非司酮等引起流产的机制可能与其能下调HLA-G的水平有关[1]，进而推测这些药物在免疫逃逸方面具有抗肿瘤作用。本部分研究首先筛查出表达HLA-G阳性的卵巢癌细胞株，进而研究天花粉蛋白、米非司酮对其中HLA-G mRNA表达的影响，并与顺铂相比较，以其为卵巢癌的免疫治疗提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 培养细胞:卵巢癌细胞株卵巢浆液性囊腺癌(SKOV3)、卵巢粘液性囊腺癌(3AO)、卵巢腺癌细胞株(OVCAR3)，由河北省肿瘤研究所科研中心提供。高表达HLA-G的绒毛膜癌JEG-3细胞株，购于中国科学院动物研究所计划生育及生殖生物学国家重点实验室。

    1.1.2 主要试剂:RPMI1640细胞培养基购于美国Gibco公司;胎牛血清购于杭州四季青公司;四甲基偶氮唑蓝(MTT)购于Sigma公司;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒购于Fermentas公司;引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。HLA-G上游引物为 5，-AGA CGC CAA GGA TGG TGG TCA-3，下游引物为 5，-GCTCCA CGT CCTGGG TCTGGT-3;βactin上游引物5，-AAG AGA GGC ATC CTC ACC CT-3，下游引物为5，-GGA AGG AAG GCTGGA AGA TG-3。扩增产物:HLAG为770 bp，β-actin为619 bp;HLA-G单克隆抗体购于英国Abcam公司;天花粉蛋白注射液购于上海金山制药厂;米非司酮纯品(RU486)购于北京紫竹药业有限公司;顺铂购于山东齐鲁制药厂。

    1.1.3 仪器设备:酶标仪 Fluostar(BMG，德国);CO2培养箱(Heraeus，德国);倒置显微镜(Olympus，日本);HEALORCE 超净工作台。PCR 仪(Mastercycler，eppendorf，德国)、凝胶分析成像系统(VILBER，LourMAT，法国)

    1.2 方法

    1.2.1 SKOV3、3AO、OVCAR3细胞培养:用含10%胎牛血清、100 U/m l青霉素、100 g/m l链霉素 ......