赵邦荣 张香改 齐娜娜 胡振华 马静

    聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)是一种体外扩增特异DNA片段的技术，具有特异性高、敏感性强、产率高、操作简单、重复性好、快速、易自动化等突出优点，在生命科学研究及相关诸多领域已经得到了广泛应用。多重PCR是在一个反应体系中使用多对引物，针对多个DNA模板或同一模板的不同区域进行扩增的过程，满足同时分析不同DNA序列的需要，尤其是在临床检测和科学研究时，在一个反应体系中能够同时检测多种目的DNA，这不仅能节省珍贵的实验样品，而且能使以往繁琐的操作变得省时省力，具有高效快捷、高度特异敏感、实验成本低等优点，具有普通PCR方法不可比拟的优越性。本研究采用Y染色体10对引物探讨了基因组DNA的多重PCR反应体系中各种因素对扩增结果的影响，优化了反应体系和反应条件，以期为应用多重PCR反应检测Y染色体微缺失提供稳定可靠的方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 引物:检索NCBI的UniSTS获得10对Y染色体引物序列(sY14、sY67、sY129、sY133、sY145、sY150、sY152、sY153、sY157、sY254)，引物由上海生工合成，纯化方法为 ULTRAPAGE。

    1.1.2 2 ×Taq MasterMix:购自康为世纪，Taq polymerase 0.25 U/μl，终浓度为 1 × Taq PCR Buffer，1.5 mmol/L MgCl2，200 μmol/L dNTPmix。

    1.1.3 DNA模板提取:血液基因组提取试剂盒购自康为世纪，按说明提取DNA ......