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编号:287199
匹鲁卡品癫痫模型慢性期大鼠海马苔藓纤维出芽的观察
http://www.100md.com 2011年7月16日 河北医药 2011年第13期
阵挛,1材料与方法,2结果,3讨论
     陈丽丽 黄 靓妹 詹 红艳 曹亦宾

    实验动物模型是研究癫痫的重要手段。研究发现,腹腔注射匹鲁卡品(pilocarpine,PILO)是诱导癫痫发作的一种简单方便的动物模型[1,2]。PILO通过同时激动乙酰胆碱和谷氨酸受体导致大鼠癫痫发作。发作后可引起分为3个阶段的行为和脑电图变化:急性期:边缘性癫痫持续状态(status epilepsy,SE)可持续至24 h;静止期:脑电图(EEG)和行为基本正常,4~42 d;慢性自发性复发性发作(spontaneous recurrent seizures,SRS):类似于复杂部分性发作的患者,每只动物发作2~3次/周[3]。长期发作可引起类似人类颞叶癫痫的病理改变,如神经元缺失、胶质细胞增生、苔藓纤维出芽等[4,5]。因此,该模型已作为理想的动物模型之一,用于癫痫的实验研究。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 健康雄性成年Wistra大鼠60只,体重200~250 g,由河北联合大学动物实验部提供。随机分为2组,癫痫模型组(模型组)30只;0.9%氯化钠溶液对照组(对照组)30只。均进行Nissl染色及Timm银染。

    1.2 药品 PILO由美国SIGMA公司提供,硝酸银由广州市立新化工厂生产,戊巴比妥钠由北京化工厂生产,焦油紫(Crestyl Violet)由美国SIGMA公司生产,氢醌由湖北大学化工厂生产。

    1.3 动物模型制作 大鼠腹腔注射PILO 350 mg/kg,注入前30 min腹腔注入东莨宕碱1 mg/kg,以拮抗其外周胆碱能反应;注射后根据Racine[6]制定的标准判定是否有癫痫发作,并于实验当天行EEG检查。对照组大鼠腹腔注等量0.9%氯化钠溶液,观察有无癫痫发作,也于实验当天行EEG检查。Racine标准:0级无惊厥、Ⅰ级面部阵挛、Ⅱ级面部阵挛+节律点头、Ⅲ级面部阵挛+节律点头+前肢阵挛、Ⅳ级面部阵挛+节律点头+前肢阵挛+后肢站立、Ⅴ级面部阵挛+节律点头+前肢阵挛+后肢站立+跌倒。

    1.4 灌注和取材 模型组及对照组用于Nissl染色的大鼠分别于给药后3、7、10、30、60 d 灌注取材;用于 neo-Timm 染色的大鼠分别于 3、7、10、30、60 d 灌注取材。

    1.5 Nissl染色 切片置于二甲苯中脱脂3 min后依次放入100%、95%、70%乙醇各3 min加水,蒸馏水漂洗3 min,0.1%Crestyl Violet染色10~20 s,镜下观察背景呈白色或无色;而后依次放入70%、95%、100%乙醇各1~2 min脱水 ......

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