杨素梅 刘可玲 王立敏 高建宏 李华 高玉霞

    卵巢癌患者病死率在女性生殖道肿瘤中居首位。高转移率和复发率导致卵巢癌患者5年生存率长期徘徊在30%左右。肿瘤的侵袭与转移依赖于肿瘤新生血管形成。血管新生(angiogenesis)是指在原有血管基础上形成新的微小血管，是大多数恶性肿瘤生长和转移的前提[1]。本实验通过研究青蒿琥酯(artesunate，ART)对人卵巢癌CAOV3细胞促血管新生效应的影响及其机制，以进一步明确ART抗卵巢癌作用机制，探索卵巢癌治疗新途径。

    1 材料与方法

    1.1 药物与试剂 人卵巢癌CAOV3细胞由上海细胞生物研究所提供。ART购于桂林南药股份有限公司(批号:090902;批准文号，国H:10930187)，使用前5%碳酸氢钠注射液溶解。血管内皮生长因子(VEGF)、酶联免疫吸附法(ELISA)检测试剂盒购于深圳晶美生物技术有限公司。

    1.2 细胞培养 人卵巢癌CAOV3细胞在含10%胎牛血清、青霉素100 U/ml、链霉素100 μg/ml的RPMI-1640中37℃、5% CO2培养箱常规培养。取处于对数生长期的卵巢癌CAOV3细胞，分别给予不同浓度ART处理(ART处理组)。单纯RPMI-1640培养基为阴性对照，无药物作用的卵巢癌CAOV3细胞为阳性对照。

    1.3 条件培养液收集 按照Kini等[2]的方法，首先将卵巢癌CAOV3细胞放入RPMI-1640不加或加入不同浓度的ART中培养48 h，然后用RPMI-1640将RPMI-8226细胞冲洗3次，并在无血清1640液中孵育4 h;收集细胞后用无血清1640液稀释至1×106个/ml，继续培养24 h。台盼兰排除试验检测卵巢癌CAOV3细胞的活力 >95%。无菌条件下 1 200 r/min和12 000 r/min分别离心10 min，制条件培养液，保存于-80℃。

    1.4 主动脉环体外生长实验 取大鼠胸主动脉，切成1 mm长的主动脉环。首先将1.2 mg纤维蛋白原和0.5 U牛凝血酶溶于无血清培养液MCDB-131 ......