胡万宁 甘建辉 毛瑞英 孙桂苓 宋雨婷 刘秀立 王春立 陈东

    随着血浆代用品的应用日益广泛，研究表明，羟乙基淀粉类血浆代用品(HAES)对体内抗肿瘤免疫系统无不良影响[1]，并且术前输注羟乙基淀粉能有地减轻手术和麻醉导致机体免疫系统功能的抑制[2]。但血浆代用品用于非恶性肿瘤患者的研究国内外报道亦少见。本试验试图研究贺斯对健康者血液中免疫系统细胞因子在体外的影响，以检验其是否抑制健康者的免疫系统。为羟乙基淀粉类血浆代用品的临床应用提供更广泛的理论及试验依据。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选取2008年3至12月河北省唐山市人民医院健康志愿者30例，其中男18例，女12例;年龄25～40岁。在严格无菌的条件下，分别抽取静脉血20ml入无菌试管，并以肝素抗凝，待用。在超净台内分离出单个核细胞，计数后将细胞平均分成5组:1640培养液阴性对照组、10%血浆对照组、10%贺斯试验组、20%贺斯试验组、40%贺斯试验组，然后再将各组分成阴性对照组、加脂多糖(LPS)、加植物血凝素(PHA)，使单个核细胞在不同的培养液中培养48 h后，1 500 r/min离心5 min后汲取上清液，待检测。

    1.2 试验方法 应用晶美生物工程(深圳)试剂盒行双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)检测各上清液中细胞因子IL-10和IL-12和的浓度。双抗体夹心ELISA法(以IL-12为例):抗人IL-12单抗包被于酶标板上，标本/标准品中的IL-12与单抗结合，游离成分被洗去。同时加入辣根过氧化物酶标记的亲合素和生物素化的抗人IL-12抗体，生物素与亲合素特异性结合，抗人IL-12抗体与结合在单抗上的人IL-12结合形成免疫复合物，未结合部分被洗去。加入显色剂，若反应孔中有IL-12，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂呈现蓝色，加终止液变黄。在450 nm处测OD值;IL-12浓度与OD450值呈正比，通过绘制标准曲线可求出标本中IL-12的浓度 ......